抗氧化剂在减轻ARDS肺纤维化中的作用及其机制研究
本文关键词：抗氧化剂在减轻ARDS肺纤维化中的作用及其机制研究
更多相关文章： 抗氧化剂 肺纤维化 上皮间质转化 氧化应激 TGF-β1
【摘要】：目的:本课题首先通过临床观察脓毒症ARDS(Acute respiratory distress syndrome,ARDS)患者呼吸末氢的变化,提示我们氢可能在ARDS肺损伤及修复中起一定作用;然后我们通过构建内毒素(Lipopolysaccharide,LPS)诱导的小鼠ARDS肺纤维化模型,重点观察补充外源性氢对LPS诱导肺纤维化是否具有保护作用,并对氢的作用机制进行研究;与此同时,我们还观察了天然的抗氧化剂白藜芦醇(Resveratrol,RSV)在LPS诱导肺纤维化中的作用,并探讨相关机制。内容和方法:第一部分:通过收集临床中脓毒症ARDS患者及健康志愿者呼吸气体,用气相色谱分析法对其中氢的含量进行检测。第二部分:ICR小鼠随机分为对照组,模型组,富氢生理盐水组。模型组小鼠予以单次气管内滴注LPS(5mg/kg)构建小鼠肺纤维化模型,观察7d,14d,21d,28d时肺组织的病理演变过程。采用Masson染色观察肺组织病理胶原分布情况;碱性水解法与ELISA法检测肺组织中羟脯氨酸及I型胶原含量评估肺脏纤维化的程度;免疫组化染色、Western Blot方法检测肺组织中E-cadherin和a-SMA的表达变化观察上皮间质转化(Epithelial-mesenchymal transition,EMT)的进展;ELISA法检测TGF-β1含量,Western Blot方法检测p-Smad2/Smad3、Smad4蛋白水平表达的改变反映TGF-β1下游信号通路的变化;检测MDA含量,T-AOC、SOD、CAT活性反映肺组织的氧化应激水平。富氢生理盐水组分为3个亚组,在气管滴注LPS后即刻分别腹腔注射富氢生理盐水(2.5、5、10 ml/kg),每天给予等量的氢水,持续28天。对照组:气管内滴注与模型组等量的生理盐水,同时腹腔注射等量的生理盐水,每天1次,观察28天,于相应时间点行上述相关检测。第三部分:ICR小鼠随机分为对照组,模型组,白藜芦醇组,白藜芦醇组在气管内滴注LPS后即刻腹腔注射RSV(0.3mg/kg),每天给予等量的RSV,持续28天。对照组及模型组处理同第二部分,腹腔注射等量的RSV溶剂,每天一次,持续28天,然后进行相关检测(同第二部分)。主要结果:第一部分:ARDS患者与健康人相比,呼吸氢含量明显减少。第二部分:LPS处理21至28天后,可造成肺组织中胶原分布增加,羟脯氨酸及I型胶原含量增多;LPS可诱导EMT的进程;在LPS作用21至28天后,LPS刺激TGF-β1生成明显增多,激活其下游的Smad信号转导通路,并可诱导快速的氧化应激的发生,表现为7天时MDA明显增多,T-AOC,CAT,SOD活性明显下降,并可持续4周。相反,富氢生理盐水可减轻LPS诱导的EMT及肺纤维化程度,抑制LPS诱导的氧化应激及TGF-β1生成。第三部分:白藜芦醇也可逆转LPS诱导的EMT,减轻肺组织纤维化的程度。同时,白藜芦醇可抑制LPS诱导的氧化应激,TGF-β1生成及Smad信号转导通路的激活。结论:临床上ARDS患者呼吸氢含量减少,提示我们氢可能在ARDS肺损伤及修复中起一定作用;而补充外源性富氢生理盐水可减轻LPS诱导的肺纤维化及EMT,其机制可能与氢抑制氧化应激及TGF-β1生成有关;天然自由基清除剂白藜芦醇也可减轻LPS诱导的EMT及肺纤维化,其机制可能与其对氧化应激状态的调节及对TGF-β1/Smad信号转导通路的调控有关。抗氧化剂的使用或可作为减轻ARDS相关肺纤维化的一种有效的辅助治疗手段。
【关键词】：抗氧化剂 肺纤维化 上皮间质转化 氧化应激 TGF-β1
【学位授予单位】：上海交通大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2015
【分类号】：R459.7;R563.8
【目录】：
- 摘要5-7
- ABSTRACT7-11
- 符号说明11-13
- 绪论13-16
- 第一部分 脓毒症ARDS患者呼吸氢含量变化16-24
- 对象与方法17-19
- 研究结果19-20
- 讨论20-24
- 第二部分 富氢生理盐水减轻内毒素诱导的肺纤维化及其机制研究24-52
- 材料与方法24-27
- 实验方法27-35
- 研究结果35-46
- 1、气管内滴注LPS可诱导小鼠肺纤维化35-37
- 2、LPS可诱导肺组织发生上皮间质转化（EMT）37-38
- 3、LPS激活TGF-β1 信号通路38-39
- 4、LPS上调肺组织内氧化应激水平39-41
- 5、富氢水可减轻内毒素诱导的肺纤维化及EMT41-44
- 6、富氢水抑制肺组织中LPS诱导的TGF-β1 生成44-45
- 7、富氢水抑制肺组织中LPS诱导的氧化应激水平45-46
- 讨论46-52
- 第三部分 白藜芦醇减轻内毒素诱导的肺纤维化及其机制研究52-60
- 材料与试剂52
- 实验方法52-53
- 研究结果53-58
- 1、RSV减轻内毒素诱导的肺纤维化及EMT53-55
- 2、RSV抑制肺组织中LPS诱导的TGF-β1 信号转导通路的激活55-56
- 3、RSV抑制肺组织中LPS诱导的氧化应激水平56-58
- 讨论58-60
- 结论60-61
- 参考文献61-72
- 综述 急性呼吸窘迫综合征肺纤维化的研究进展72-85
- 参考文献77-85
- 致谢85-87
- 学术论文和科研成果目录87
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