特异激活SHH信号通路对急性脑缺血大鼠NGF、BDNF表达的影响

发布时间：2017-09-14 10:40

  本文关键词：特异激活SHH信号通路对急性脑缺血大鼠NGF、BDNF表达的影响

  更多相关文章： 神经生长因子 神经源性营养因子 Shh信号通路 purmorphamine

【摘要】：背景和目的 缺血性脑血管疾病的病理损伤机制极为复杂。近年来的研究发现了一些具有神经保护作用的因子，在缺血性脑血管疾病的恢复过程中发挥着重要作用。其中，神经生长因子(nerve growth factor, NGF)与脑源性神经营养因子(brain-derived neurotrophic factor, BDNF)二者属于神经生长因子家族，也称神经营养素(NTs)。两者能够促进中枢神经系统的发育，对于神经系统中成熟神经元的正常功能的维持也是非常必要的。 Shh信号通路在胚胎发育及神经系统发育过程中扮演十分重要的角色。实验研究证实，，脑缺血后激活Shh信号通路可以促进室下区(subventricular zone,SVZ)神经元细胞的再生。Shh信号通路由以下几部分组成：Shh蛋白、Ptch蛋白、Smo蛋白和锌指转录因子Gli蛋白。Shh信号通路被激活以后，Shh和Ptch结合，解除Smo的抑制效应，Smo促使Gli蛋白进入细胞核，目的基因从而被诱导。下游靶基因Gli蛋白的表达将增加，因此可以将Gli蛋白作为Shh信号是否激活的标志。 本实验通过线栓法制作永久性大脑中动脉缺血模型，通过免疫组化学法检测缺血脑组织中NGF、BDNF的表达，观察Purmorphamine特异激活Shh信号通路后NGF、 BDNF的变化进而论述激活Shh信号通路在脑缺血中的神经保护作用。 材料与方法 选取SD大鼠，运用线栓法制作永久性大脑中动脉缺血模型（MCAO）。选取健康成年雄性SD大鼠110只，SPF级，体重190～250g。实验分组如下：假手术组（A组）；缺血组（B组）；药物干预组（C组）。其中，假手术组10只，缺血组和药物干预组按照时间点的不同可分为5个亚组即6h，24h，48h，72h，7天，每个亚组10只。假手术组只分离血管不插线栓。缺血组和药物干预组采用线栓法造模。药物干预组在造模成功后立即腹腔注射Purmorphamine溶液（0.691mg/kg）。Purmorphamine溶液配制方法：溶于有机溶剂二甲基甲酰胺（DMF），并且完全溶解。假手术组和缺血组给予同等剂量的DMF。成功造模后，观察实验动物是否具有神经缺损症状，依据标准评分法，评分不达标的动物均弃之不用，排除出组的动物在后续的试验中予以补充。于既定时间点，取出脑组织标本。免疫组化法检测缺血侧脑组织的NGF、BDNF的表达，逆转录聚合酶反应（Real-time PCR）检测缺血侧脑组织Gli-1mRNA的表达。 数据处理 采用SPSS21.0统计软件处理数据，所有结果均采用均数±标准差(±s)表示。组间比较用单因素方差分析，两两比较用LSD检验，检验水准：a=0.05。结果 1.各组NGF的表达情况 假手术组有少量NGF表达。缺血组、药物干预组在缺血后6小时即有表达。24小时表达明显增多，在缺血72小时达到峰值，之后呈下降趋势。缺血组、药物干预组和假手术组相比，NGF表达明显增多，差异具有统计学意义(P0.05)。药物干预组和缺血组各时间点相比，NGF表达明显增多，差异具有统计学意义(P 0.05)。 2.各组BDNF的表达情况 假手术组有少量BDNF表达。缺血组、药物干预组在缺血后6小时即有表达。至72小时达到峰值，之后呈下降趋势。缺血组、药物干预组和假手术组相比，BDNF表达明显增多，差异具有统计学意义(P 0.05)。药物干预组和缺血组各时间点相比，BDNF表达明显增多，差异具有统计学意义(P 0.05)。 3.各组Gli-1mRNA的表达情况 假手术组有少量Gli-1mRNA表达。缺血组、药物干预组在缺血后6小时即有表达。24小时表达明显增多，之后呈下降趋势。缺血组、药物干预组和假手术组相比，Gli-1mRNA表达明显增多，差异具有统计学意义(P 0.05)。药物干预组和缺血组各时间点，Gli-1mRNA表达明显增多，差异具有统计学意义(P0.05)。 结论 1.外源性给予Purmorphamine后，可以有效激活Shh信号通路。 2. Shh信号通路被有效激活后，可以促进脑缺血组织中NGF和BDNF的表达，从而发挥神经修复作用。
【关键词】：神经生长因子 神经源性营养因子 Shh信号通路 purmorphamine
【学位授予单位】：郑州大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2014
【分类号】：R743.3
【目录】：

• 摘要4-7
• Abstract7-12
• 引言12-14
• 材料与方法14-22
• 1 材料14-16
• 2 实验方法16-22
• 结果22-24
• 1．各组大鼠脑组织中 NGF 的表达情况22
• 2．各组大鼠脑组织中 BDNF 的表达情况22-23
• 3．各组大鼠脑组织中 Gli-1mRNA 的表达情况23-24
• 讨论24-29
• 1．脑缺血与神经损伤24-25
• 2．脑缺血与 NGF25
• 3．脑缺血与 BDNF25-26
• 4．激活 Shh 信号通路与神经修复26-29
• 结论29-30
• 参考文献30-34
• 附图34-37
• 综述37-58
• 参考文献51-58
• 英文缩略词58-59
• 个人简历59
• 在校期间发表学术论文59-60
• 致谢60

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本文编号：849558