细胞外热休克蛋白70在严重烧伤大鼠肠粘膜的表达变化及其对肠道T细胞免疫功能的影响

发布时间：2017-09-20 16:35

  本文关键词：细胞外热休克蛋白70在严重烧伤大鼠肠粘膜的表达变化及其对肠道T细胞免疫功能的影响

  更多相关文章： 烧伤 细胞外热休克蛋白70 T淋巴细胞 肠道免疫

【摘要】：目的：观察严重烧伤大鼠肠粘膜组织细胞外热休克蛋白70及IL-2表达变化情况，另外分离严重烧伤后大鼠肠道淋巴结CD3+T细胞，予以细胞外HSP70（eHSP70）刺激体外培养，以此来探讨eHSP70对肠道T细胞免疫的影响。 方法：把60只健康雄性SD大鼠，随机分成正常对照组和烧伤后3小时、6小时、12小时、24小时、48小时组，每组各10只，用控时控温控压蒸汽烫伤仪在每只烫伤组大鼠背部造成全身体表面积为30%的III度烧伤，于各时相点颈椎脱臼处死SD大鼠，提取肠粘膜组织，采用ELISA方法检测eHSP70和IL-2的表达变化。采用流式细胞分选技术分选严重烧伤12h后雄性SD大鼠肠道淋巴结CD3+T细胞，将体外培养的CD3+T细胞随机分成空白对照组和eHSP70低浓度、中浓度、高浓度刺激组共4组。其中空白对照组不加eHSP70，低、中、高浓度组分别加入终浓度为5μg/ml、10μg/ml、20μg/ml的eHSP70，采用流式细胞技术检测Th1/Th2细胞比例及CD3+T细胞凋亡率；采用ELISA方法检测IL-2和IL-10在培养液上清中的表达变化。 结果： （1）大鼠烧伤后各时相点肠粘膜eHSP70的表达均降低，与正常对照组(1278±327.3)比较，烧伤后3h(538±40.4)大鼠肠粘膜eHSP70表达已经下降，烧伤后12h(314±20.5)达到最低值，约为正常对照组的1/4，在烧伤后24h(528±40.4)后表达开始逐步回升，差异均有统计学意义（P0.05）。 （2）与正常对照组(48.63±7.89)比较，各烫伤组大鼠肠粘膜IL-2的表达均降低，于烧伤后12h(25.36±8.58)达到最低值，差异有统计学意义（P0.05）。 （3严重烧伤大鼠肠粘膜eHSP70和IL-2相对表达量呈正相关r=0.920,p0.01。 （4）与空白对照组比较，eHSP70刺激组Th1的比例均增高，而Th2的比例均降低，并均以终浓度为10μg/ml的中浓度组表现最明显，差异有统计学意义(P0.05)。 （5）与空白对照组比照，eHSP70刺激组的CD3+T细胞总凋亡率均下降，，其中终浓度为10μg/ml的中浓度组凋亡率最低，差异有统计学意义(P0.05)。 （6）与空白对照组比较，eHSP70刺激组的IL-2表达均增加，其中终浓度为10μg/ml的中浓度组增加最明显，差异有统计学意义(P0.05)；而eHSP70刺激组中IL-10与空白对照组比较表达均无明显变化，差异无统计学意义(P0.05)。 结论：大鼠严重烧伤后肠粘膜组织eHSP70含量下降，可能参与了肠道的T细胞免疫反应。适宜浓度的eHSP70可以降低T细胞凋亡率，增强T细胞活性，促进T细胞由Th0向Th1方向分化，促进IL-2的释放，可作为纠正或逆转烧伤后免疫功能紊乱状态的一个新的靶点。
【关键词】：烧伤 细胞外热休克蛋白70 T淋巴细胞 肠道免疫
【学位授予单位】：南昌大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2014
【分类号】：R644
【目录】：

• 摘要3-5
• ABSTRACT5-9
• 中英文缩略词表9-10
• 第1章 引言10-12
• 第2章 材料和方法12-20
• 2.1 实验动物的选择12
• 2.2 实验主要仪器和试剂12-13
• 2.2.1 实验主要仪器12
• 2.2.2 实验主要试剂12-13
• 2.2.3 实验溶液配制13
• 2.3 实验分组13-14
• 2.3.1 动物实验分组13-14
• 2.3.2 体外实验分组14
• 2.4 实验样品准备14-17
• 2.4.1 SD 大鼠烫伤模型建立14
• 2.4.2 肠粘膜组织 eHSP70、IL-2 样本提取14
• 2.4.3 肠道及肠系膜 PP 结淋巴细胞分离14-15
• 2.4.4 CD3~+T 细胞流式细胞仪分选15-16
• 2.4.5 重组 eHSP70 刺激 CD3~+T 细胞体外培养16-17
• 2.5 实验方法和步骤17-19
• 2.5.1 ELISA 法检测肠粘膜组织eHSP70、IL-2 和细胞培养液中IL-2、IL-10含量17-18
• 2.5.2 流式细胞术检测 Th1 和 Th2 细胞比例18
• 2.5.3 流式细胞术检测 CD3~+T 细胞凋亡率18-19
• 2.6 统计学处理19-20
• 第3章 结果20-26
• 3.1 严重烧伤大鼠肠粘膜 eHSP70 的表达变化20-21
• 3.2 严重烧伤大鼠肠粘膜 IL-2 的表达变化21
• 3.3 严重烧伤大鼠肠粘膜 IL-2 和 eHSP70 相关性分析21-22
• 3.4 eHSP70 刺激后 Th1 和 Th2 细胞比例变化22-23
• 3.5 eHSP70 刺激后 CD3~+T 细胞凋亡率变化23-25
• 3.6 eHSP70 刺激后 IL-2 和 IL-10 的表达变化25-26
• 第4章 讨论26-31
• 4.1 严重烧伤大鼠肠粘膜组织细胞外 HSP70 表达变化及其意义26-27
• 4.2 eHSP70 对严重烧伤大鼠 T 细胞免疫功能的影响27-31
• 4.2.1 eHSP70 对严重烧伤大鼠 Th1/Th2 漂移的影响27-28
• 4.2.2 eHSP70 对严重烧伤大鼠 T 细胞凋亡的影响28-29
• 4.2.3 eHSP70 对严重烧伤大鼠免疫细胞因子分泌的影响29-31
• 第5章 结论31-32
• 致谢32-33
• 参考文献33-37
• 攻读学位期间的研究成果37-38
• 综述38-43
• 参考文献41-43

【参考文献】

中国期刊全文数据库 前4条

1 崔书强;赖丽丽;赵杰修;安楠;封文平;尚文元;宗丕芳;冯葆欣;张卫英;;不同湿度高温环境下急性大强度运动应激前后人体血浆游离HSP72浓度变化[J];中国运动医学杂志;2013年01期

2 邓春;刘进言;熊武;周建大;;热休克蛋白70抑制大鼠脓毒症血清诱导的心肌细胞凋亡及其信号转导通路的研究[J];中国医师杂志;2012年08期

3 张红艳,吕农华;热休克蛋白与应激后胃黏膜保护[J];中华消化杂志;2004年02期

4 刁力,李成文,盛志勇,佟欣,郭振荣,贾晓明,柴家科;大鼠烫伤早期肠黏膜组织热休克蛋白HSP70和HSP90的表达[J];中华烧伤杂志;2000年05期

本文编号：889211