肠三叶因子与谷氨酰胺对烧伤后肠道谷氨酰胺转运能力影响的实验研究

发布时间：2017-09-22 15:52

  本文关键词：肠三叶因子与谷氨酰胺对烧伤后肠道谷氨酰胺转运能力影响的实验研究

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【摘要】：目的： 观察肠三叶因子(intestinal trefoil factor, ITF)及谷氨酰胺(glutamine，Gln)对烧伤后肠道谷氨酰胺转运能力的影响并探讨其可能的机制。 方法： 1.体内试验：按随机数字表将160只SD大鼠随机分为正常对照(C)组，烧伤对照(B)组，烧伤+ITF治疗(I)组，烧伤+Gln治疗(G)组。C组只给予麻醉和剃毛，不予烧伤；B组给予94℃水烫伤18秒，造成30%体表面积Ⅲ度烧伤。伤后各组均给予正常饮食及饮水；I组于烧伤后6h后灌胃给予ITF(1mg/kg.d)，G组于烧伤后6h后灌胃给予Gln(1g/kg.d)，每天给药2次，B组灌胃等体积生理盐水，每天2次。观察烧伤后(post burn day, PBD)1、3及5天各项指标的变化。 (1)采用Mg2+沉淀法制备肠刷状缘膜囊(BBMV)，通过检测穿越BBMV的[3H]-Gln的放射性强度，计算出BBMV转运Gln的速率。 (2)采用黏膜刮取漂洗法分离肠上皮细胞(intestinal epithelial cell,IEC)，通过检测穿越IEC的[3H]-Gln的放射性强度，计算出IEC转运Gln速率。 (3)采用免疫印迹(Wb)法检测BBMV中Gln转运载体ASCT2及B0AT1的蛋白含量变化。 2.体外实验：体外培养大鼠小肠隐窝上皮细胞株IEC-6，建立细胞缺氧模型，实验分为常氧对照组，单纯缺氧组，缺氧＋ITF治疗(I)组，缺氧＋Gln治疗(G)组。采用Wb法检测IEC-6细胞中的腺苷酸活化蛋白激酶(AMPK)、乙酰辅酶A羧化酶(ACC)的蛋白含量及其磷酸化水平。 结果： 1.烧伤后BBMV及IEC对Gln的转运能力呈现先低后高的变化趋势。BBMV中Na+依赖性Gln转载体的转运速率在伤后第1天下降了47%，3天及5天较伤前有所增加，增幅分别为18%和14%，非Na+依赖性Gln转运速率在伤后第1天下降了32%，3天及5天分别增加16%及2%；大鼠IEC中Na+依赖性Gln转运速率在烧伤后1、3、5天变化不明显，增幅小于12%，非Na+依赖性Gln转运速率分别增加了11%、38%及30%。 2.给予Gln后BBMV及IEC对Gln转运速率明显增加。与B组相比，，G组BBMV中Na+依赖性Gln转运速率在伤后1、3及5天增幅分别为76%、73%及23%，非Na+依赖性Gln转运速率增幅分别为62%、66%及21%；IEC中Na+依赖性Gln转运速率在伤后1、3及5天增幅分别为43%、44%及31%，非Na+依赖性Gln转运速率增幅分别为6%、39%及63%。 3.给予ITF后BBMV及IEC对Gln转运速率明显增加。与B组相比，I组BBMV中Na+依赖性Gln转运速率在伤后1、3及5天增幅分别为30%、12%及32%，非Na+依赖性Gln转运速率增幅分别为25%、6%及64%；伤后大鼠IEC中由Na+依赖性Gln转运速率在伤后1、3及5天增幅分别为14%、21%及31%，非Na+依赖性Gln转运速率增幅分别为7%、15%及37%。 ４.烧伤后BBMV中ASCT2蛋白含量变化不明显，B0AT1蛋白含量在伤后1-5天均明显下降。与B组相比，给予Gln后ASCT2蛋白含量变化不明显，B0AT1蛋白含量在1-5天明显增高，分别为B组的1.57、2.37及2.38倍；给予ITF后ASCT2蛋白含量分别为B组的1.41、2.33及1.78倍， B0AT1则分别为B组的1.22、1.78及1.15倍。 5.缺氧条件下AMPK及ACC蛋白含量未发生明显改变，但其磷酸化水平明显增高。与单纯缺氧组相比，给予ITF后AMPK及ACC蛋白含量均未见显著变化，但其磷酸化p-AMPK及p-ACC蛋白含量均明显提高；给予Gln后无论是AMPK含量还是其磷酸化水平均未发生明显变化(P＞0.05)。 结论： 1.烧伤后BBMV及IEC对Gln转运速率未发生显著变化，给予外源性Gln或ITF能促进BBMV及IEC对Gln的转运。 2. ITF能显著增加BBMV中ASCT2及B0AT1蛋白含量；Gln对B0AT1蛋白合成具有促进作用，但对ASCT2的影响不明显。 3.缺氧能够激活AMPK信号通路，给予ITF后AMPK通路被进一步激活，ITF促进BBMV及IEC中Gln转运的机制可能与激活AMPK信号通路有关。 4.Gln对AMPK信号通路无明显影响，推测Gln促进BBMV及IEC中Gln转运的机制可能与Gln的底物刺激效应有关。
【关键词】：肠三叶因子 谷氨酰胺 肠上皮细胞 肠刷状缘膜囊 谷氨酰胺转运载体 腺苷酸活化蛋白激酶 肠道 大鼠 烧伤
【学位授予单位】：蚌埠医学院
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2014
【分类号】：R644
【目录】：

• 摘要5-8
• Abstract8-11
• 前言11-14
• 第一部分 肠三叶因子及谷氨酰胺对烧伤后肠道谷氨酰胺转运能力的影响14-28
• 1 材料与方法14-18
• 2 结果18-25
• 3 讨论25-27
• 4 结论27-28
• 第二部分 肠三叶因子及谷氨酰胺对肠道谷氨酰胺转运能力影响的机制研究28-51
• 1 材料与方法28-37
• 2 结果37-47
• 3 讨论47-50
• 4 结论50-51
• 参考文献51-57
• 致谢57-58
• 附录 A 主要英文缩写一览表58-59
• 附录 B 实验仪器与设备59-60
• 附录 C 个人简历60-61
• 附录 D 综述肠道谷氨酰胺转运载体研究进展61-68
• 参考文献66-68

【参考文献】

中国期刊全文数据库 前2条

1 彭曦,尤忠义,黄显凯,张才全,贺光照,解伟光,全竹富;谷氨酰胺颗粒对创伤患者肠黏膜屏障功能的影响[J];中华创伤杂志;2004年07期

2 陈蕾,邓诗琳,梁建伟,曹丽萍,高志刚;反相高效液相色谱监测烧伤患者早期口服谷氨酰胺的效果[J];中华烧伤杂志;2003年01期

本文编号：901719