大鼠吗啡戒断大麻素信号对伏隔核突触传递调节功能的影响的研究

发布时间：2018-12-09 18:54

【摘要】：奖赏通路在药物成瘾和戒断中发挥了重要的作用。伏隔核（NAc）是这条通路中的一个重要核团。已知，表达于突触前膜的大麻素1型受体（CB1Rs）广泛地分布于NAc上。并且，CB1Rs和NAc一样，也参与了对药物成瘾的调节。早先的研究发现，可卡因间断给药1周后，CB1Rs参与了对纹状体γ 氨基丁酸（GABA）突触的调节。受此启发，我们研究了大鼠在吗啡（MOR）戒断时，CB1Rs对NAc突触的传递调节功能的影响。在本研究中，7天的重复皮下给药（MOR）可以成功地诱导大鼠的条件性位置偏爱（CPP）模型。运用电生理学方法可以看到，CB1Rs激动剂WIN55,212 2对NAc神经元的自发抑制性突触后电流（sIPSC）、微小抑制性突触后电流（mIPSC）以及刺激诱发的抑制性突触后电流（eIPSC）的抑制作用在3天MOR组和3周MOR组中较同时间的生理盐水组（SAL组）明显增强，并且这个增强作用可以被预先灌流的CB1Rs抑制剂AM251阻断。而在5周MOR组和5周SAL组的比较中，这种抑制增强作用消失。用同样方法观察兴奋性突触后电流（EPSCs），结果显示，WIN55,212 2对NAc神经元的自发兴奋性突触后电流（sEPSC）、微小兴奋性突触后电流（mEPSC）以及刺激诱发的兴奋性突触后电流（eEPSC）的影响，与SAL组在3天、3周和5周时比较没有统计学差异（P0.05）。根据以上结果，我们对比了MOR组和SAL组在3天、3周以及5周时的CPP变化，结果发现，3天MOR组和3周MOR组的大鼠保留了对MOR配对空间的偏爱，而在5周时这种现象消失。由此我们得出结论，在MOR戒断时，大鼠NAc中CB1Rs的含量增多和（或者）功能增强，并且GABA电流的敏化作用是逐渐可逆的。以上结果表明，调节CB1Rs对于治疗阿片类药物成瘾可能具有重要的理论和现实意义。本实验分为四个部分： 第一部分:大鼠吗啡戒断模型的建立以及WIN55,212 2实验浓度的确定 运用CPP方法，研究人员可以预测人类和动物对成瘾药物的依赖性和渴求性。因此CPP实验是一项被广泛应用于检测药物成瘾的行为学方法。在本研究中，我们应用此法观察7天皮下间断注射MOR是否可以成功诱导大鼠对MOR的偏爱，进而制成稳定的大鼠吗啡CPP模型。结果显示，反复的MOR注射可以成功地诱导大鼠的CPP形成（P 0.05），而用SAL处理的大鼠却没有形成对SAL的偏爱（P0.05）。因此，通过CPP方法，我们可以成功地建立大鼠MOR戒断模型。 为了保证本研究的稳定性和可重复性，我们进行了剂量依赖性实验。我们发现，0.1μM的Win55,212 2对MOR组和SAL组较实验前没有统计学差异（P0.05）。然而，0.3μM，1μM，2μM，4μM的Win55,212 2能够剂量性地抑制MOR组和SAL组的sIPSC的频率和eIPSC的幅度（P 0.05）。因此，，为了保证实验的稳定性并且尽量避免药物的毒性作用，我们选择Win55,212 2的实验浓度为1μM。 第二部分：CB1Rs激动剂和抑制剂对NAc中的MSNs的EPSCs的影响 已知在NAc神经元中，突触前刺激CB1Rs可以减少谷氨酰胺能神经传递。因此，为了观察谷氨酰胺能传递是否参与了CB1Rs对药物成瘾和戒断的影响，在全细胞记录模式下，我们运用电压钳技术，首先给包含NAc结构的脑片灌流bicuculline，分离sEPSC。接着我们又加入河豚毒素（TTX），分离出mEPSC。而后，用电刺激包含NAc的脑片，检测了eEPSC的变化情况。 Win55,212 2对MOR组的sEPSC的频率和幅度、mEPSC的频率和幅度以及eEPSC的幅度与SAL组相比，没有统计学差异（P0.05）。 第三部分:CB1Rs激动剂和抑制剂对于NAc中的MSNs的IPSCs的影响以及CPP留存情况 在全细胞记录模式下，我们运用电压钳技术，首先给包含NAc结构的脑片灌流NMDA受体拮抗剂APV和非NMDA受体拮抗剂CNQX，分离自发抑制性突触后电流（sIPSC），检测GABA突触的电生理活性。接着我们又加入TTX，分离出微小抑制性突触后电流（mIPSC）。而后，用电刺激含NAc的脑片，检测了刺激诱发的抑制性突触后电流（eIPSC）的变化情况。以上所有的电流均可被GABA受体阻断剂bicuculline阻断。 与SAL组相比，Win55,212 2可以显著地降低3天MOR组和3周MOR组的sIPSC的频率、mIPSC的频率和eIPSC的幅度（P 0.05），而这些效果可以被预先灌流的AM251阻断（P 0.05），这意味着GABA能突触对CB1Rs刺激反应性的增加。但是，Win55,212 2对5周MOR组的sIPSC的频率、mIPSC的频率和eIPSC的幅度的抑制作用，与SAL组相比，没有统计学差异（P0.05）。 我们根据实验分组中的时间指标检查了SD大鼠的CPP留存情况。结果显示，3天MOR组和3周MOR组大鼠依旧保留了对造模时MOR配对空间的偏爱（P 0.05）。而5周MOR组的这种现象消失（P0.05）。 第四部分：CB1Rs激动剂对双脉冲比（PPR）的影响以及NAc中MSNs的形态学研究 我们运用PPR法确认CB1Rs对NAc的GABA能传递的刺激作用是否为突触前机制。在MOR组和SAL组的大鼠脑片上，将间隔刺激时间设为50ms，我们发现Win55,212 2对PPR的反应显著增强（eIPSC2eIPSC1）（P 0.05）。这个实验结果说明了CB1Rs的作用是突触前机制。 在本实验中，我们在倒置显微镜下，以大鼠脑解剖图谱为依据，在鼠脑的冠状位上找到并确认了NAc区域。我们通过前联合定位NAc。并且，在NAc的背侧和内侧可以发现大量的MSNs。
[Abstract]:......
【学位授予单位】：第四军医大学
【学位级别】：博士
【学位授予年份】：2013
【分类号】：R749.61

【共引文献】

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本文编号：2369869