β-淀粉样蛋白（1-42）寡聚体制备、鉴定及神经毒性研究

发布时间：2019-05-27 00:58

【摘要】：目的:1.探讨不同制备条件对Aβ寡聚体合成的影响,以及利用原子力显微镜(AFM)观察β-淀粉样蛋白(Aβ_(1-42))的不同聚集形态结构;2.Aβ寡聚体对大鼠记忆学习能力损害及神经毒性研究。方法:1.寡聚体合成、形态观察:以PBS稀释并合成,合成条件分别为:4℃1d、4℃7d、37℃1d,然后通过蛋白免疫印迹方法观察Aβ寡聚体聚集水平;用AFM轻敲模式及相位成像技术观察Aβ_(1-42)不同聚集形态结构;2.Aβ寡聚体对大鼠记忆学习损害及神经毒性研究:通过立体定位仪进行大鼠两侧侧脑室寡聚体等注射,建立阿尔茨海默病(AD)模型;使用Morris水迷宫定位航行试验检测大鼠学习记忆能力;采用HE染色观察大鼠皮质、海马神经细胞的形态学变化;3.采用SPSS19.0统计软件统计学分析。结果:1.通过蛋白免疫印迹方法观察发现,Aβ寡聚体在4℃1d下以二聚体、三聚体(6-15Kd之间)为主,4℃7d下以四聚体(19Kd上下)、十二聚体(49-64Kd之间)为主,37℃1d下以三聚体(15Kd上下)、六聚体(30Kd上下)、十四聚体(70Kd上下)为主。2.通过AFM观察到不同形态的Aβ聚集体,包括球状寡聚体、环状结构、初级原纤维、成熟原纤维、纤维体等。初级原纤维呈串珠样链状结构,成熟原纤维呈致密的绳状结构。3.Aβ寡聚体对大鼠记忆学习能力:Aβ寡聚体组、Aβ纤维体组大鼠的逃避潜伏期与造模前比较均延长,具有统计学意义(P0.05);与Aβ纤维组比较,Aβ寡聚体组大鼠的逃避潜伏期明显延长(P0.05)。4.Aβ寡聚体对大鼠神经元的影响:Aβ寡聚体组较纤维组大鼠神经元形态更明显,Aβ寡聚体组海马神经元排列紊乱,细胞数减少,胞质大量空泡形成,核固缩,深染。结论:1.制备温度和时间是Aβ寡聚体聚集水平的重要条件,在一定条件下,时间越长、温度越高,聚集水平越高;2.AFM技术是研究蛋白质聚集过程中动态变化的较好工具,通过AFM可观察到Aβ动态聚集过程,包括球状寡聚体、环状结构、初级原纤维、成熟原纤维、纤维体等;3.高分子量Aβ寡聚体较纤维体的神经毒性更强。
[Abstract]:Objective: 1. The effects of different preparation conditions on the synthesis of A 尾 oligomer were investigated, and the different aggregation morphology and structure of 尾-starch protein (A 尾 _ (1 鈮，

本文编号：2485776