小鼠胚胎干细胞诱导分化为神经前体细胞及其移植治疗Aβ海马注射损伤AD大鼠的研究

发布时间：2020-04-19 06:39

【摘要】： 研究背景与目的阿尔茨海默氏病(Alzheimer disease,AD)主要的病理学特征为脑内(主要为海马和皮层)细胞外淀粉样蛋白(amyloid peptides)斑块沉积、细胞内神经纤维缠结(Neural fibrillary tangles,NFTs)以及神经元丢失。其中β淀粉样多肽(β-amyloid peptides,Aβ)的过量生成与沉积,被认为是AD主要的发病机制之一。沉积的Aβ具有神经毒性,可导致神经元树突和轴突萎缩,神经元变性、死亡与丢失。因此,在体研究中通过Aβ多肽脑内(包括侧脑室、海马)注射来建立AD模型,已被广泛采用。AD的病因及其发病机制尚不完全清楚,目前根据其发病的病理生理学特点,临床主要的药物治疗手段与方案都是着力于改善患者认知功能障碍,阻止或延缓发病进程。药物治疗措施可以起到一定的疗效,但无法弥补中晚期患者大脑皮层及海马神经元的丢失,因而对于中晚期AD疗效有限。对于AD这一以神经元丢失为中晚期特征病变的神经系统退行性病变而言,神经细胞移植被视为能从根本上解决细胞丢失的全新治疗策略。胚胎干细胞(Embryonic stem cells,ESCs)是从着床前胚胎的内细胞团中分离得到的细胞系,具有全能分化潜能、能够在体外培养、无限增殖、易于基因操作而不失分化潜能。体外培养ES细胞的关键就是既要保持其快速分裂增殖能力,又要控制其未分化状态。通过无血清培养法可维持ES的未分化状态并且可获得较高纯度的神经前体细胞(Neural precursor cells,NPCs)。NPCs既具有增殖分化潜能,又没有直接移植ES细胞生成畸胎瘤的危险,故是较好的神经移植材料。诸多神经细胞移植治疗AD模型的研究中采用的种子细胞来源是自体或异体的神经干细胞,但是却面临移植材料、种子细胞来源匮乏以及伦理学等限制。目前尚没有关于使用ES细胞来源的神经细胞移植治疗AD模型的研究报道。而且目前国内外研究中使用Aβ海马注射来建立AD大鼠模型,多数着重于Aβ在体神经毒性研究,包括组织病理学和行为学改变。而涉及细胞移植治疗的相关研究中细胞移植途径集中反映在侧脑室注射,偶有海马和皮质细胞移植报道。侧脑室范围广、易定位,手术难度小;但是侧脑室移植后细胞会发生广泛迁移,包括穹隆海马伞、胼胝体、隔区、室管
【图文】：

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图 1.大鼠 MORRIS 水迷宫行为测试系统示意图D 模型大鼠的组织病理学鉴定：周行 Morris 水迷宫行为学检测后，部分模型大鼠以及生理刚果红染色、尼氏染色、GFAP 免疫组化检测。观察 AD、神经元丢失以及 Aβ1-40 注射区域的胶质细胞增生和 A。织的固定：大鼠经戊巴比妥钠腹腔注射麻醉，4℃生理盐水脉灌注固定，取全脑。再以 4％多聚甲醛后固定过夜，进醛配置）脱水直至组织块沉底。色：10μm 冰冻切片裱片后自然风干，ddH2O 稍浸润后梯苏木素染液 3min.，自来水漂洗玻片干净，，入 1%盐酸乙醇条带清晰则自来水终止分化。再入 1%刚果红水溶液浸染

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NS 注射对照组大鼠寻找平台轨迹分布 Aβ注射组大鼠寻找平台轨迹分布图 2. 定位航行试验中大鼠寻找平台轨迹分布示意图比较（第九段第 4 次测试）NS 注射对照组大鼠探索轨迹分布 Aβ注射组大鼠探索轨迹分布图 3. 空间探索试验中撤除平台后大鼠探索轨迹分布示意图比较大鼠Morris水迷宫空间探索试验14
【学位授予单位】：第三军医大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2006
【分类号】：R749.16

【参考文献】