Apelin-13通过调控小胶质细胞极化改善慢性应激诱导大鼠抑郁样行为

发布时间：2020-05-16 04:40

【摘要】：【研究背景与目的】慢性应激诱导海马小胶质细胞激活,使其产生大量的炎性介质,并介导抑郁症的发生。小胶质细胞极化的两种表型经典型M1和替代激活M2型对中枢神经炎症有重要的调节作用,并参与了抑郁症的发生发展。已有研究显示Apelin-13具有抗抑郁的作用,但其具体的机制仍未阐明。本研究从小胶质细胞极化的角度探讨Apelin-13改善慢性应激诱导大鼠抑郁样行为的可能机制。【方法】成年雄性Sprague Dawley(SD)大鼠接受28天的慢性浸水束缚应激。每只应激组大鼠通过侧脑室微量注射Apelin-13(2μg/2μl),连续注射7天。采用糖水偏好、强迫游泳和悬尾实验检测大鼠抑郁样行为。采用Western blot检测大鼠海马小胶质细胞M1型极化标志物诱导型一氧化氮合酶(Inducible nitric oxide synthase,i NOS)、促炎因子白细胞介素-6(Interleukin-6,IL-6)和白细胞介素-1β(Interleukin-1beta,IL-1β)的蛋白表达以及小胶质细胞M2型极化标志物精氨酸酶1(Arginase 1,Arg1)、抗炎因子白细胞介素-4(Interleukin-4,IL-4)和白细胞介素-10(Interleukin-10,IL-10)的蛋白表达。采用免疫荧光双标检测小胶质细胞的标记物离子钙接头蛋白抗原(Ionized calcium bindingadaptor molecule-1,Iba-1)分别与小胶质细胞极化标志物Arg1和i NOS的免疫荧光共表达。采用脂多糖(lipopolysaccharide,LPS)(2μg/m L)处理N9小胶质细胞6 h,再用Apelin-13(0.1μM)处理24 h,Western blot检测i NOS和Arg1的蛋白表达。【结果】慢性束缚浸水应激诱导的大鼠抑郁样行为的产生;与应激组相比,Apelin-13组显著抑制大鼠相对糖水消耗、体重增量、以及强迫游泳和悬尾不动时间;慢性束缚浸水应激诱导的大鼠海马小胶质细胞极化;与应激组相比,Apelin-13抑制下调大鼠海马小胶质细胞i NOS、IL-1β和IL-6的蛋白表达,而促进了大鼠海马小胶质细胞Arg1、IL-4和IL-10的蛋白表达;Apelin-13抑制Iba-1与i NOS的共定位表达,而促进Iba-1与Arg1的共定位表达。与空白对照组比较,N9小胶质细胞LPS组Arg1的蛋白表达显著降低,i NOS的蛋白表达显著增加,而给予Apelin-13处理后,Arg1的蛋白表达显著增加,而i NOS的蛋白表达明显降低。【结论】Apelin-13改善慢性应激诱导大鼠抑郁样行为,其机制可能与调控小胶质细胞极化有关。
【图文】：

曝光。2.10 实验设计2.10.1 Apelin-13 对 CWIRS 诱导大鼠抑郁症样行为的影响大鼠在适应环境后（3-5 天），随机分为四组：无应激生理盐水组（Non stressed+ Vehicle 组），无应激 Apelin 组（Non stressed + Apelin 组），应激生理盐水组（CWIRS + Vehicle 组）及应激 Apelin 组（CWIRS +Apelin 组）。应激组接受慢性浸水束缚应激（CWIRS）4 周，无应激组则不予应激。应激结束后，第二天所有实验大鼠进行侧脑室置管，手术后恢复 24 h。随后连续 7 天四组均给予侧脑室微注射生理盐水（2 μL/只）或 Apelin-13 (3 μg/2μL/只)。给药结束后，四组实验大鼠均进行自发活动，强迫游泳，悬尾行为学检测。

17图 2 大鼠 CWIRS 与免疫荧光检测流程图2.10.3 Apelin-13 对 CWIRS 诱导大鼠海马细胞因子表达的影响大鼠在适应环境后（3-5 天），随机分为四组：无应激生理盐水组（Non stressed+ Vehicle 组），无应激 Apelin 组（Non stressed + Apelin 组），应激生理盐水组（CWIRS + Vehicle 组）及应激 Apelin 组（CWIRS +Apelin 组）。应激组接受慢性浸水束缚应激（CWIRS）4 周，无应激组则不予应激。应激结束后，第二天实验大鼠进行侧脑室置管，，手术后恢复 24 h。随后连续 7 天四组均给予侧脑室微注射生理盐水（2 μL/只）或 Apelin-13 (2 μg/2μL/只)。大鼠给药结束，待 24 h 后处死大鼠并取脑分离海马。采用 Western blot 法分别检测海马内 M1 型标志分子iNOS 的蛋白表达及其促炎因子 IL-6，IL-1β 的蛋白表达与 M2 型标志分子 Arg1的蛋白表达及其抗炎因子 IL-4，IL-10 的蛋白表达。图 3 大鼠 CWIRS 与 Western blot 检测细胞因子流程图2.10.4 Apelin-13 对 CWIRS 诱导大鼠海马小胶质细胞极化的影响大鼠在适应环境后（3-5 天）
【学位授予单位】：南华大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2018
【分类号】：R749.4

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本文编号：2666191