阿尔茨海默病实验免疫治疗与致病机理的研究

发布时间：2020-06-20 01:13

【摘要】： β-淀粉样蛋白(β-amyloid peptide,Aβ)和淀粉样前体蛋白(amyloid precursor protein,APP)与阿尔茨海默病(Alzheimer's disease,AD)的发生、发展密切相关。本论文围绕这两种蛋白开展了相关研究。为了克服从前免疫治疗AD引起的严重副作用,本论文开展了应用不同长度的Aβ的实验免疫研究。本论文表达纯化了的三种重组蛋白Aβ28H8、Aβ35H8和Aβ42H8,与Aβ42(纯品)一起,作为免疫原免疫小鼠,获得血清抗体。四种免疫原诱导产生抗体的滴度分别为1:6400、1:3200、1:6400、1:6400。研究发现,获得的四种血清抗体均能够识别包括Aβ42单体、寡聚体、原纤维和成熟纤维在内的各种聚集形式的Aβ42,具有抑制Aβ42的聚集、诱导Aβ42聚集体解聚的功效,具有抑制和中和Aβ42细胞毒性的作用。与其他三种免疫原相比,Aβ28H8主要诱导了体液免疫应答,因此可以避免由细胞免疫应答引起的炎症反应。由此证明:Aβ28是一种有效且较Aβ42更为安全的免疫原。为了进一步探讨AD的致病机理,探索APP分子间相互作用的关键区域,本论文以COS-7为靶细胞,通过免疫共沉淀、细胞伤口愈合、transwell、免疫荧光、细胞粘附等实验证实,APP对靶细胞的迁移有阻滞作用,APP分子间可以发生相互作用,并介导靶细胞间的相互聚集,或介导靶细胞在基质Aβ4-8,Aβ11,Aβ28,Aβ35,Aβ42,C99上的粘附,而Aβ42或由Aβ28诱导产生的抗体能够抑制上述所有的作用。因此可以推断:Aβ42的胞外区,特别是Aβ4-8区域,有可能是导致包含该区域的相关分子间发生相互作用的最关键区域。上述结果为免疫预防与治疗AD的疫苗设计提供了理论指导,为进一步探索AD的致病机理奠定了理论基础。
【学位授予单位】：吉林大学
【学位级别】：博士
【学位授予年份】：2010
【分类号】：R749.16
【图文】：

寡聚体,纤维,研究者,细菌毒素

成熟的 Aβ42 淀粉样纤维相比，Aβ42 寡聚体和原纤维可能具有更。Aβ42 寡聚体的结构与一类可以在细胞膜上形成通道的细菌毒素很研究者认为其毒性机理可能是在细胞膜上形成了特殊的离子通道，系失衡[17]。由于认知正常的老年人脑内也可能有大量的 Aβ42 纤维研究者对 Aβ42 与 AD 的关系存在怀疑[18，19]；但可溶性的 Aβ42 寡有更好的相关性[20，21]，这表明大量不可溶的 Aβ42 纤维可能作为一放具有细胞毒性的可溶的 Aβ42 寡聚体[13]。由此我们可以推断，清内各种聚集形式的 Aβ42，都可能对 AD 的治疗起作用。图 1.1 APP 的水解及 Aβ 的产生。……M DAEFRHDSGYEVHHQK LVFFAEDVGSNKGAIIGLMVGGV V IA TV……βαAβ40Aβ39 Aβ42γ γγ

序列,结构域,区域

APP 分子从 N 端到 C 端，总体上可以划分为三个高度保域：E1 区域，E2 区域和 C 端区域[46，47]。E1 区域包括一个肝素结合结Heparin-binding domain，HBD1），又名类生长因子结构域（growth factormain，GFLD）和一个铜结合结构域（copper-binding domain，CuBD）；E 之间是一个高度酸性的区域，在 APP751 和 APP770 分子中，酸性区域与域之间还存在一个 KPI 或 KPI 及 Ox-2 抗原结构域；E2 区域又称为 APP 域（centralAPP domain，CAPPD），包含一个促胸腺生成素序列（RERMS个高亲和力的肝素结合结构域（HBD2），E2 和其后的一小段近膜区域又图 1.2 APP 结构域划分。从 N 端到 C 端依次划分为三个高度保守的区域：E1 区域，E2 区域和 C 域（其中 RERMS 序列可能是 APP 促进细胞生长和分化的活性位点）

【共引文献】