促性腺激素释放激素与阿尔茨海默病小鼠发病机制的相关性研究

发布时间：2020-07-25 08:39

【摘要】： 目的：观察阿尔茨海默病(Alzheimer's disease, AD)小鼠发病过程中下丘脑内不同时期促性腺激素释放激素(gonadotropin releasing hormone, GnRH)表达水平的变化,并探讨GnRH与AD小鼠发病机制的相关性。方法：10周龄昆明种雌性小鼠140只,根据跳台实验成绩和体重分层后按取样周期随机分为七组：0d、30d、45d、60d、75d和90d组,每组20只,各组又设正常对照组和AD模型组各10只。正常对照组腹腔注射生理盐水和灌胃三蒸水,AD模型组腹腔注射D-半乳糖(120mg·kg-1·d-1)和灌胃氯化铝(10mg·kg-1·d-1),连续给药时间按分组确定。跳台实验观察AD小鼠学习和记忆能力；蛋白免疫印迹法(Western blot)测定海马苏氨酸231位点磷酸化tau蛋白(Tau-pThr231)水平；酶联免疫法(enzyme linked immunosorbent assay, ELISA)测定血清雌二醇(Estradiol, E2)水平；免疫组织化学观察小鼠脑组织中Aβ40、GnRH及其受体(gonadotropin releasing hormone receptor, GnRHR)的表达及分布；结果：(1)与正常对照组比较,AD模型组小鼠45d、60d、75d、90d时学习成绩下降(P0.05),记忆错误次数增多(P0.01),潜伏期缩短(P0.05)；(2)与正常对照组比较,AD模型组小鼠45d、60d、75d、90d时Aβ40和Tau-pThr231表达增高(P0.05)；(3)与正常对照组比较,AD模型组小鼠血清雌二醇水平随造模给药时间延长呈下降趋势。90d时E2水平明显降低(P0.05)；(4)与正常对照组比较,AD模型组小鼠60d、75d、90d时GnRH表达减少(P0.05); GnRHR未见差异。结论：(1)随着造模给药时间延长,AD小鼠学习记忆能力逐渐减退,脑组织中Aβ40的表达逐渐升高,Tau-pThr231表达水平呈增高趋势,与Aβ40的表达呈正相关,Tau-pThr231可以标定AD模型小鼠的发病进程。(2)血清雌二醇含量、下丘脑GnRH表达水平随着AD小鼠发病的时间进程呈下降趋势,与AD的病理改变有相关性。其参与AD发病进程的可能机制为：随着AD病程的进展,下丘脑分泌的GnRH减少,体内雌二醇水平下降,从而使Aβ40沉积和Tau-pThr231表达增强,进而促进了AD的病情发展。
【学位授予单位】：遵义医学院
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2010
【分类号】：R749.16
【图文】：

图1小鼠下丘脑从前往后结构示意图(摘自Kei仇a.J.Fr肛水lin《TheMouseBraininstereotaxiccoor动加ates》一seeondedition)实验免疫组织化学染色采用SABC法，具体步骤如下:(l)切片经脱蜡致水:二甲苯I和二甲苯11脱蜡各IOmin，依次100%酒精I、100%酒精n、95%酒精、85%酒精、70%酒精，浸泡各smin，蒸馏水浸泡smin;(2)消除内源性过氧化物酶活性:3%HZO:溶液新鲜配置，室温孵育1smin，蒸馏水冲洗，sminX3次;(3)微波抗原修复:将石蜡切片浸入0.o1M构椽酸盐缓冲液中，保鲜膜封口，微波炉加热至沸腾后断电，间隔IOmin后继续加热至沸腾后断电，冷却，PBS冲洗，sminx3次;(4)滴加5%BSA封闭液，置于37℃40min后甩去多余液体;

BCA法测定小鼠海马组织蛋白匀浆的蛋白浓度，然后各组取等量蛋白上样行SDS一PAGE后的电泳图，同标准蛋白Marker比较，在68kDa处可见一较清晰条带，目的蛋白分子量为68kDa与理论值相符，结果见如下图2。团a105-50es35—25_图2各组海马组织的SDS一队GE F19.2SDS一 PAGEanalysisofhiPPoeamPusineachgrouP3.2蛋白免疫印 迹(Westemblot)用抗几u一pThr231抗体对目的蛋白进行鉴定，结果见图2。正常对照组无免疫印迹条带，说明Tau一pThr231在正常状态下不表达或表达量极微。而AD模型组约30d时，Tau一pThr231开始有少量表达，并且随造模时间延长表达量逐渐升高，75d时有所下降，但仍在高位表达。Lane 123生 5678几u一Tbr231必礁簇68kDap一aetin42kDa图3海马组织Tau一pThrZ引蛋白免疫印迹 F193:WesternblotoftauProtein(tau一 PThr231)inrathiPPoeamPus.注:1至7泳道依次为正常对照组:od、15d、30d、45d、60d、75d和90d条带;9至15泳道依次为AD模型组:od、15d、30d、45d、60d、75d和90d条带;第8泳道为MarkerNote:Lanel一7， ControlgrouPod、 1sd、30d、45d、60d、 75dand90d:Laneg一15

50es35—25_图2各组海马组织的SDS一队GEF19.2SDS一PAGEanalysisofhiPPoeamPusineachgrouP3.2蛋白免疫印迹(Westemblot)用抗几u一pThr231抗体对目的蛋白进行鉴定，结果见图2。正常对照组无免疫印迹条带，说明Tau一pThr231在正常状态下不表达或表达量极微。而AD模型组约30d时，Tau一pThr231开始有少量表达，并且随造模时间延长表达量逐渐升高，75d时有所下降，但仍在高位表达。Lane123生5678

【参考文献】

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本文编号：2769593