BMP4上调神经细胞胆碱能表达与治疗老年痴呆模型大鼠的实验研究

发布时间：2020-10-26 17:44

　　 阿尔茨海姆病(Alzheimer's disease, AD)是一种神经变性性疾病。AD发病机制中较为公认的是中枢神经胆碱能系统损伤学说。本研究组以前的研究表明骨形态发生蛋白4(Bone morphogenetic protein4, BMP4)可在离体条件下诱导成年大鼠海马区神经干细胞的胆碱能分化,并在在体条件下上调该区神经细胞的胆碱能表达。但BMP4是否仅诱导神经干细胞的胆碱能分化,对神经元的胆碱能表达是否也具有上调作用,尚不了解。通过脑内海马齿状回注入BMP4上调该区神经细胞胆碱能表达,是否对AD模型大鼠具有治疗作用,国内外尚未见报道。 目的:通过观察BMP4对离体培养的大鼠海马区神经干细胞的分化和神经元的胆碱能表达的影响,以进一步了解BMP4对神经干细胞胆碱能诱导分化作用和明确对神经元胆碱能表达是否具有上调作用;通过将BMP4注入成年大鼠海马齿状回区,进一步了解BMP4体内对成年大鼠海马齿状回区神经细胞的胆碱能表达的作用;通过将BMP4注入海马齿状回区,了解其对AD模型:大鼠是否具有治疗作用。 方法:(1) 从幼龄SD大鼠海马区分离并培养神经干细胞,并行Nestin免疫细胞化学染色鉴定。在培养液中加入或不加入BMP4,用ChAT免疫细胞化学染色及FITC标记的流式细胞检测法,鉴定胆碱能神经细胞。(2) 从胎龄SD大鼠海马及大脑皮层分离并培养神经元,并行MAP2免疫细胞化学染色鉴定。在培养液中加入或不加入BMP4,用ChAT免疫细胞化学染色及FITC标记的流式细胞检测法,鉴定胆碱能神经细胞。(3)在脑立体定位仪下,将BMP4或NS注入成年大鼠左侧海马齿状回,28天后取海马齿状回脑组织,行ChAT免疫组化染色,用Image-prog-plus图像分析系统测量海马齿状回ChAT阳性细胞面积,数据采用STATA7.0软件进行t检验。(4) 在脑立体定位仪下,离断成年大鼠左侧穹隆海马伞,建立AD模型。将BMP4或NS注入AD模型大鼠手术侧海马齿状回区,28天后用Mirros水迷宫检测大鼠空间记忆行为;并取海马齿状回脑
【学位单位】：中国人民解放军军医进修学院
【学位级别】：硕士
【学位年份】：2005
【中图分类】：R749.16
【部分图文】：

图1培养条件下幼鼠海马区神经干细胞的形态变化倒置光学相差显微镜x200A为接种即刻，细胞呈圆形悬浮状，胞膜清晰，胞质透明，未见明显胞核，细胞周围有圈光晕(箭头所示);B为接种即刻，呈自我旋转状态的细胞(箭头所示);C为培养24h时部分细胞分裂形成哑铃状(箭头所示)。D为培养4h8时，细胞分裂增殖成为细胞团，部分细胞体向周边伸出小的突起，成为前体样细胞(箭头所示);E为培养7d一sd时，贴壁生长的部细胞胞体呈梭形，伸出较长的突起，呈神经元或胶质细胞状;其它细胞仍然呈悬浮状态，圆或伸出小突起的前体细胞状(箭头所示)。

呈现棕黄色的CllAI，反应阳性细胞，约占总细胞数的2.664士1.47%(图3A);而在未加BMP4的对照组的培养皿中，仅有少数呈现棕黄色的ChAT反应阳性的细胞，约占总细胞数的13.42士1.33%(图3B)。经统计学处理，BMP4组的Ch户J阳性细胞比例显著高于无BMp4的对照组(P<0.02)，见表z。表1BMP4体外诱导分化幼鼠海马神经干细胞的Ch产T阳性细胞比例(%)样本BMP4组对照组126.815.3229.412.4324.417.6430.211.5522.410.3又士526.64士1.47**13.42土1.33**表示BMP4组与对照组比较，P<.001.2.2BMP4体外诱导分化的幼鼠海马神经干细胞的FITC标记的胆碱能神经细胞流式细胞术将加入或未加入BMP4培养10天的幼鼠海马神经干细胞行FITC标记的胆碱能神经细胞流式细胞检测，测得BMP4组细胞的ChAT阳性率为23.42%(图4A)，而无BMP4对照组细胞的ChAT阳性率为7.79%(图4B)。BMP4组的ChAT阳性细胞比例高于无BMP4的对照组。结果表明:BMP4可体外诱导幼鼠海马区神经干细胞的胆碱能分化。

图5培养条件下胎鼠海马区神经元的形态变化A、B倒置光学显微镜x400;C、D倒置光学显微镜ZxooA为接种即刻，细胞迅速开始贴壁，星梭形，伸出2一3个短的突起，贴壁细胞胞体的周围有显的光晕。B、C为培养%h时，细胞呈神经元样形态，胞体伸出较长的数量不等的突起，细胞的突起互相连接成网络状。D为培养7d一d8时，细胞胞体群集，突起有聚集成束的趋势。
【参考文献】

相关期刊论文 前1条

1 常艳,薛毅珑,罗芸,田磊,潘静坤,崔忻;骨形态发生蛋白4对大鼠脑神经干细胞的胆碱能诱导分化效应[J];标记免疫分析与临床;2004年01期

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1 林秋霞;大脑皮层神经元体外诱导分裂研究[D];中国人民解放军军事医学科学院;2004年

本文编号：2857305