靶向β-淀粉样蛋白的单链抗体的多样性及其效应分析

发布时间：2021-04-21 10:57

　　阿尔茨海默氏病（Alzheimer’s disease,AD）是一种最常见的神经退行性疾病。遗传因素、环境因素和年龄是AD发生和发展的主要因素,年龄在65岁以上的老年人群中,大约每50人中就有一位患有痴呆症。鉴于现如今全球老龄化趋势逐渐加重,势必会对我们的社会和经济提出更高的要求。因此积极研发治疗AD的药物就显得愈发刻不容缓。AD主要的病理学标志是胞外b-淀粉样蛋白的沉积或淀粉样斑块（Senile plaque,SP）和胞内神经元纤维缠结（Neurofibrillary tangles,NTFs）,其中淀粉样斑块主要由淀粉样前体蛋白（APP）被β和γ分泌酶顺序切割后产生的Aβ42聚集形成;神经元纤维缠结主要由过度磷酸化的Tau蛋白（微管相关蛋白）聚集形成。目前,治疗AD的主要疗法是依据β-淀粉样蛋白假说提出的靶向β-淀粉样蛋白的疗法。本论文在前期研究中获得的一种抗Aβ寡聚体的单链抗体ZZ6的基础上,依据构象模拟与分子对接结果,发现在ZZ6的43、226、241与244位点处与Aβ42形成了一个环绕的结合部位,但是由于空间位阻过大且两者之间并没有形成有效的氢键,因此,我们针对此4个关键点... 

【文章来源】：吉林大学吉林省 211工程院校 985工程院校 教育部直属院校

【文章页数】：75 页

【学位级别】：硕士

【文章目录】：
摘要
abstract
第一章 绪论
    1.1 阿尔茨海默氏病
        1.1.1 淀粉样蛋白级联假说与神经病理学
            1.1.1.1 淀粉样蛋白级联假说
            1.1.1.2 AD病理生理学
        1.1.2 临床症状与AD的诊断治疗
            1.1.2.1 临床症状
            1.1.2.2 AD的诊断与治疗方法
        1.1.3 APP的切割及Aβ42的产生
        1.1.4 Aβ的聚集及其神经毒性
        1.1.5 AD的遗传因子及风险因子
    1.2 人工单链抗体（single chain antibody fragment,scFv）
        1.2.1 人工单链抗体简介
        1.2.2 本论文思路
第二章 单链抗体与Aβ42的制备
    2.1 引言
    2.2 实验材料
        2.2.1 菌种
        2.2.2 试剂
        2.2.3 主要仪器
    2.3 实验方法
        2.3.1 单链抗体ZZ6 突变体重组表达载体的构建
        2.3.2 单链抗体的诱导表达及纯化
        2.3.3 Aβ42的制备
    2.4 实验结果
        2.4.1 单链抗体ZZ6突变体重组表达载体的构建
        2.4.2 单链抗体的诱导表达及纯化
        2.4.3 Aβ42的制备
    本章小结
第三章 靶向β-淀粉样蛋白的单链抗体的性质与功能分析
    3.1 引言
    3.2 实验材料
        3.2.1 材料
        3.2.2 试剂
        3.2.3 主要仪器
    3.3 实验方法
        3.3.1 单链抗体对Aβ42寡聚体（表观）结合力的检测
        3.3.2 单链抗体对Aβ42寡聚体（表观）亲和力常数的测定
        3.3.3 单链抗体对Aβ42聚集的抑制作用分析
        3.3.4 单链抗体抑制Aβ42对细胞毒性作用的检测
        3.3.5 单链抗体与Aβ42相互作用产物分析
            3.3.5.1 反相高效液相色谱法测定单链抗体与Aβ42相互作用产物
            3.3.5.2 Western Blot法测定单链抗体与Aβ42相互作用产物
        3.3.6 单链抗体维系细胞迁移性的分析
            3.3.6.1 细胞划痕实验（Cell Wound Healing Assay）
            3.3.6.2 细胞迁移实验（Transwell Assay）
    3.4 实验结果
        3.4.1 单链抗体对Aβ42寡聚体（表观）结合力的检测
        3.4.2 单链抗体对Aβ42寡聚体（表观）亲和力常数的测定
        3.4.3 单链抗体对Aβ42聚集的抑制作用分析
        3.4.4 单链抗体抑制Aβ42对细胞毒性作用的检测
        3.4.5 单链抗体与Aβ42相互作用产物分析
            3.4.5.1 反相高效液相色谱法测定单链抗体与Aβ42相互作用产物
            3.4.5.2 Western Blot法测定单链抗体与Aβ42相互作用产物
        3.4.6 Aβ42寡聚体存在的情况下单链抗体对SH-SY5Y细胞迁移的影响
            3.4.6.1 细胞划痕实验（Cell Wound Healing Assay）
            3.4.6.2 细胞迁移实验（Transwell Assay）
    本章小结
结论与讨论
附件1
参考文献
作者简介及在学期间所取得的科研成果
致谢



本文编号：3151634