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circHomer1在甲基苯丙胺诱导神经元损伤中的作用及其机制

发布时间:2021-09-22 02:24
  背景:甲基苯丙胺(methamphetamine,METH)是一类常见的精神兴奋性药物,长期滥用会导致神经系统发生严重且不可避免的损伤性改变。大量研究表明,METH可诱导神经细胞毒性损伤,包括凋亡、自噬等。但其诱导神经元损伤的准确机制仍不明确。近年研究发现,环状RNA(circular RNA,circRNA)参与神经系统疾病的调控。然而,目前circRNA在METH致神经毒性的病理过程中的作用及机制研究还相对薄弱。目的:检测METH诱导原代脑皮层神经元损伤中的circRNA表达谱变化;筛选潜在的参与调控METH神经毒性过程的circRNA,预测差异表达circRNA的生物学功能;探究位于其下游的基因变化,及它们与成瘾行为之间的联系。方法:(1)METH损伤原代脑皮层神经元后的circRNA表达谱分析结果:培养新生鼠脑皮层神经元并使用合适浓度的METH进行处理并提取样本;应用高通量转录组测序技术检测METH处理后的circRNA表达谱变化;对差异表达的circRNA关联的基因进行GO分析及KEGG分析,并构建聚类分析及火山图分析寻找差异表达的circRNA;利用qRT-PCR对候选的c... 

【文章来源】:山东大学山东省 211工程院校 985工程院校 教育部直属院校

【文章页数】:70 页

【学位级别】:硕士

【部分图文】:

circHomer1在甲基苯丙胺诱导神经元损伤中的作用及其机制


图1?METH诱导原代脑皮层神经元损伤

长度分布,高通量,测序,绿色


?(nt)??c????…?.?-10?1??£?Ankrd11??v?31?^??|?Whscl??:-一,十必…?Rap9efe??I?LinSA??I?Homerl????戀?C1?C2?C3?T1?T2?T3??D?2.5-??r?a?—?一關??li2,0'?^?^?I?_?Control??ililil?il?ihl?ii?ft?h?y??V.?V?I?I?I?I?I?I?I?I?I?I??。,V%,?/??图2高通量转录组测序明确METH处理后差异表达的circRNA。(A)我们根据测序所??得的circRNA的差异倍数(FC)及P值制作了火山图,以P值小于0.05及FC21.5倍为??筛选界限,红色表示上调的circRNA,绿色表示下调的circRNA。(B)我们对测序所??得circRNA的长度分布进行统计,横坐标以50nt为长度间隔。(C)左侧所示为测序所??有circRNA的热图,我们筛选了?8个circRNA如(C)右侧所示,红色表示上调,绿色??表示下调。C表示对照组,T表示加药处理组。(D)我们对筛选的circRNA及预测的??2个6?:1^八进行卩10^01检测,结果以2-^?形式展现。***:表示/><0.001;****表??31??

序列,环状,稳定性,号外


response?to?cocaine?)之间存在联系。??circHomerl的parent基因Homerl位于小鼠第十三号染色体上。Homerl共含12??个外显子,其中第3,4,5,6号外显子组成/circHomerl,且由第3号外显子??头与第6号外显子尾反向剪接形成circHomerl的环状结构。我们根据该反向剪??接位点(back-splice?junction)设计qRT-PCR特异性引物,并对扩增产物进行测??序发现其包含该位点序列,证实circHomerl的环状结构(图4A)。并且,我们??通过RNase?R核酸外切酶消化实验,发现circHomerl能够耐受RNase?R消化作??用,而线性HomerlmRNA则易被消化(图4B),进一步提TKcircHomerl稳定??的环状结构特征。随后,我们针对circHomerl的特异位点设计了荧光探针进行??FISH定位实验。我们利用共聚焦显微镜观察到circHomerl的红色荧光主要分布??于胞质中(图4C)。??A?Chr13(qC3)?…一wim-一_irrr?r???■?_ir—?—?ti?■■?0???■?Mock????????'?I?—-1?_?RNase?R??E*〇n1???E?ni2?■■*■■§?■■一"W"???"?E*〇"11?Exoi.12?J?T?丨’…|??ir.?■??.^;?i?ill?I??Oi?f?i?n?f?It?i?i?^?li?i?i?i?i?H?i?f??/??c??circHomerl?DAPI?Merge??DID??图4?circHomerl的环状结构及稳定性。(A

【参考文献】:
期刊论文
[1]Circular HDAC9/microRNA-138/Sirtuin-1 Pathway Mediates Synaptic and Amyloid Precursor Protein Processing Deficits in Alzheimer’s Disease[J]. Yanjun Lu,Lu Tan,Xiong Wang.  Neuroscience Bulletin. 2019(05)
[2]中脑边缘奖赏系统参与阿片类药物成瘾的环路机制[J]. 孙国林,张咏梅.  中国药理学通报. 2019(05)
[3]甲基苯丙胺的急性和慢性作用机理的研究进展[J]. 卫星辰,周小爽,徐嘉珂,白洁.  生命科学. 2014(09)



本文编号:3402947

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