施普善对血管性痴呆大鼠认知功能的影响及CREB信号分子和凋亡蛋白的作用

发布时间：2017-09-27 03:32

  本文关键词：施普善对血管性痴呆大鼠认知功能的影响及CREB信号分子和凋亡蛋白的作用

  更多相关文章： 血管性痴呆 慢性脑低灌注 双侧颈总动脉结扎 环磷酸腺苷反应元件结合蛋白 信号通路 细胞凋亡 施普善

【摘要】：目的:随着全球人均寿命的延长,老年人群所占的比例越来越大,痴呆的发病率也在逐年攀升。目前,血管性痴呆(vascular dementia,VD)在西方国家已成为继阿尔茨海默病(Alzheimer’Disease,AD)后的第二大痴呆类型,在某些亚洲国家已成为老年人痴呆的首要原因。但是由于其发病机制的复杂,目前尚未出现一种能明确治疗VD的药物。施普善(cerebrolysin,CBL)是一种蛋白水解的肽类物质,它的作用类似于内源性神经营养因子,可以改善认知功能,但是在慢性低灌注(chronic cerebral hypoperfusion,CCH)所致的VD中,作用机制仍未阐明。本实验旨在观察VD大鼠学习记忆能力、海马CA1区形态学的变化,并且以CREB、p-CREB、Bcl-2、Bax作为实验研究指标,来观察CBL的干预作用。方法:以3月龄250-300g雄性Sprague-Dawley(SD)大鼠为研究对象,采用双侧颈总动脉结扎(bilateral common carotid artery occlusion/two vessel occlusion,BCCAO/2VO)的手术方式来建立VD动物模型。随机分为4组:假手术组(Sham组),2VO模型组,CBL低剂量治疗组(2.5ml/kg)和CBL高剂量治疗组(5ml/kg)。术后24h经腹腔注射给予CBL低剂量组2.5ml/kg/d、CBL高剂量组5ml/kg/d、假手术对照组、2VO模型组等剂量生理盐水腹腔注射,连续给药28天。28天后通过Morris水迷宫测定行为学的变化,水迷宫实验完成后,在光镜下观察四组大鼠的海马组织形态学变化;使用Western blot法定量分析海马区p-CREB、CREB、Bcl-2、Bax的表达情况,免疫组织化学技术测定海马CA1区p-CREB表达变化。结果:1大鼠行为学测试结果1.1各组大鼠的学习情况:在定位航行阶段,2VO模型组大鼠与Sham组相比,逃避潜伏期明显延长(P0.05);而给予CBL治疗后(高低剂量组),缩短了逃避潜伏期的时间,明显提高了学习能力。1.2记忆能力测试情况在空间探索试验中,2VO模型组大鼠在目标象限停留的时间比值较sham组明显缩短(P0.01),而给予CBL治疗后的两组大鼠在目标象限停留的时间比值较2VO模型组明显延长(P0.05)。2海马区形态学改变情况Sham组大鼠海马CA1区神经元排列整齐、层次分明,结构清晰,细胞核形状规则,核仁清楚,细胞浆染色均匀。与Sham组相比,2VO模型组:海马CA1区神经元丢失明显,细胞排列松散不规则,大量胞体固缩,细胞核形状不规则,核仁消失,部分细胞坏死,胞质呈强嗜酸性。CBL治疗组(尤其是高剂量组)与2VO模型组相比,海马CA1区细胞密度增加,细胞层次较清晰,排列较整齐,细胞核规则,核仁清晰,偶见少量核固缩变性的神经元。3 Western blot结果3.1 VD大鼠海马CREB、p-CREB、Bcl-2、Bax蛋白的表达变化:3.1.1与sham组对比,CREB及p-CREB蛋白表达水平下降,后者具有统计学意义(P0.01)。3.1.2与sham组对比,Bcl-2蛋白表达水平下降,Bax蛋白表达水平升高,两者均具有统计学意义(P0.01)。3.2 CBL对VD大鼠海马CREB、p-CREB、Bcl-2、Bax蛋白表达的影响:3.2.1 CBL治疗组与2VO组相比,CREB及p-CREB蛋白表达水平增加,后者具有统计学意义(P0.05)。3.2.2 CBL低剂量治疗组与2VO组相比,Bcl-2蛋白表达增加,Bax蛋白表达减少,两者均具有统计学差异(P0.05);CBL高剂量治疗组与2VO组相比,Bcl-2蛋白表达增加(P0.01),Bax蛋白表达下降(P0.05)。3.2.3 CBL低剂量与CBL高剂量相比,CREB、p-CREB、Bcl-2、Bax蛋白表达有变化,但无统计学差异。4免疫组化方法检测大鼠海马p-CREB的表达变化光镜下可见p-CREB免疫阳性表达,免疫阳性反应物呈棕黄色,在神经元胞浆和胞核均有表达。Sham组海马CA1区p-CREB有明显表达,2VO组CAI区p-CREB表达低于Sham组和CBL治疗组,图像分析结果表明,2VO组p-CREB阳性反应产物平均光密度明显低于Sham组和CBL治疗组(前者P0.01,后者P0.05)。结论:1 采用BCCAO建立的VD模型是一种稳定、有效、理想的动物模型。2 海马CA1区神经元结构破坏和丢失可能是VD模型学习记忆下降的形态学基础。3 CBL可有效改善VD大鼠认知功能,提高其空间学习记忆能力,改善其海马区病理损伤。作用机制可能与调节CREB和抑制凋亡蛋白相关。
【关键词】：血管性痴呆 慢性脑低灌注 双侧颈总动脉结扎 环磷酸腺苷反应元件结合蛋白 信号通路 细胞凋亡 施普善
【学位授予单位】：河北医科大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2016
【分类号】：R749.13
【目录】：

• 摘要5-8
• ABSTRACT8-11
• 英文缩写11-12
• 引言12-14
• 第一部分 施普善对血管性痴呆大鼠认知功能的影响14-26
• 前言14-15
• 材料与方法15-18
• 结果18-19
• 附图19-20
• 附表20-21
• 讨论21-23
• 小结23-24
• 参考文献24-26
• 第二部分 施普善对血管性痴呆大鼠海马组织病理学的影响26-35
• 前言26-27
• 材料与方法27-29
• 结果29-30
• 附图30-31
• 讨论31-32
• 小结32-33
• 参考文献33-35
• 第三部分 施普善对血管性痴呆大鼠CREB信号分子及凋亡蛋白的影响35-54
• 前言35-36
• 材料与方法36-44
• 结果44-45
• 附图45-48
• 附表48-49
• 讨论49-51
• 小结51-52
• 参考文献52-54
• 结论54-55
• 综述 脑源性神经营养因子在长期突触可塑性中的作用55-62
• 参考文献59-62
• 致谢62-63
• 个人简历63-64

【相似文献】

中国期刊全文数据库 前10条

1 高永娟,曹根涛,殷刚,王鑫,季朝能,顾少华,倪晓华;CREB4基因的表达谱分析和功能初步研究(英文)[J];遗传学报;2005年09期

2 陈志斌;管强;曹学兵;徐岩;王岚;孙圣刚;;Effect of Antisense FosB and CREB on the Expression of Prodynor- phin Gene in Rats with Levodopa-induced Dyskinesias[J];华中科技大学学报(医学英德文版);2006年05期

3 耿义群;苏敏;徐小虎;田东萍;关计添;王艳;;低硒饮食对发育期大鼠脑氧化代谢及CREB表达的影响[J];脑与神经疾病杂志;2006年06期

4 毛凤霞;姚梅玲;;CREB与学习记忆及情绪关系[J];医药论坛杂志;2008年22期

5 刘明月;胡园;穆丽华;黄志雄;余冰颖;刘屏;;基于CREB通路研究3,6'-二芥子酰基蔗糖的神经保护分子机制[J];中国药理学与毒理学杂志;2012年03期

6 张正洪;曲鹏;方秀斌;;降钙素基因相关肽对局灶性脑缺血再灌注大鼠海马CREB和磷酸化CREB的上调作用[J];解剖学杂志;2007年02期

7 畅晓燕,方家椿,王耐勤,刘彤,苏虹;8-氯腺苷通过磷酸化修饰提高转录因子CREB的活性[J];癌症;2003年04期

8 张广辉;王超峰;;CREB依赖的突触长时程增强[J];中国医学物理学杂志;2011年04期

9 宋海龙;郑焱;王晓民;;CREB信号通路在神经系统中的调控及功能[J];中国生物化学与分子生物学报;2013年09期

10 张瑞新,聂红,祁金顺,乔健天;单侧外周伤害性刺激诱发大鼠脊髓中转录因子CREB的双侧磷酸化(英文)[J];神经解剖学杂志;2002年01期

中国重要会议论文全文数据库 前10条

1 毛凤霞;;CREB与学习记忆及情绪关系[A];经济策论（下）[C];2011年

2 刘明月;胡园;穆丽华;黄志雄;余冰颖;刘屏;;基于CREB通路研究3,6′-二芥子酰基蔗糖的神经保护分子机制[A];第十五届中国神经精神药理学学术会议论文摘要[C];2012年

3 刘健;张涛;何秀娟;许蜀闽;王培勇;;主动脉平滑肌细胞钙信号与CREB活性的关系[A];第八次全国动脉硬化性疾病学术会议论文集[C];2005年

4 Shuaishuai Huang;Ren Yu;Ping Wang;Xue Wang;Rong Fang;Jeff X.Zhou;;CaSR-increased[Ca~(2+)]i,modulates cytoskeletal subtype genes through transcriptional regulation of CREB in cancer cells[A];华东六省一市第22届解剖与组织胚胎学学术年会暨山东解剖学会成立60周年纪念大会论文汇编[C];2013年

5 李军;曹红;李国政;连庆泉;;CREB与缺血性脑损伤[A];2008年第七次华东六省一市麻醉学学术会议暨浙江省麻醉学术年会论文汇编（上册）[C];2008年

6 Yu-xian Yan;Yong Guo;Yuan Zhang;Yue-ying Song;Yuan-wei Gong;Qi Lv;Chen-yan Wang;Xi-zheng Zhang;;Mechanical Strain regulates osteoblast proliferation through Ca~(2+)-CaMK-CREB Signal Pathway[A];第十届全国生物力学学术会议暨第十二届全国生物流变学学术会议论文摘要汇编[C];2012年

7 高亚南;高歌;龙彩瑕;李俊发;;重复性低氧对小鼠脑内CREB磷酸化及蛋白表达的影响[A];中国神经科学学会第六届学术会议暨学会成立十周年庆祝大会论文摘要汇编[C];2005年

8 胡海燕;张瑞;张永芳;夏宗勤;胡雅儿;;CREB在知母皂苷元调节M1受体中的作用[A];第九届中国中西医结合实验医学学术研讨会论文汇编[C];2009年

9 胡海燕;张瑞;张永芳;夏宗勤;胡雅儿;;CREB在知母皂苷元调节M1受体中的作用[A];中国核科学技术进展报告——中国核学会2009年学术年会论文集（第一卷·第9册）[C];2009年

10 涂海军;许婵娟;PHILIPPE RONDARD;JEAN-PHILIPPE PIN;刘剑峰;;GABA_BR介导的CREB信号转导机制研究[A];中国药理学会第九次全国会员代表大会暨全国药理学术会议论文集[C];2007年

中国重要报纸全文数据库 前3条

1 迈文;CREB1可致女性抑郁症[N];医药经济报;2002年

2 日信;CREB基因活化可提高记忆力[N];医药经济报;2003年

3 余志平 编译;寻找逝去的记忆[N];医药经济报;2002年

中国博士学位论文全文数据库 前10条

1 应达时;舒郁颗粒对抑郁模型大鼠行为学及海马组织内BDNF、CREB、Bcl-2表达的影响[D];长春中医药大学;2015年

2 张克剑;神经心理应激对肺腺癌荷瘤裸鼠CREB信号传导通路作用研究[D];吉林大学;2016年

3 杨慧鹏;昆虫CREB激活机制及Arrestin蛋白功能的研究[D];浙江大学;2013年

4 邓亮;CREB-1在TGF-β3抗肝纤维化中的作用[D];华中科技大学;2013年

5 黄金明;CREB-1载体的构建及其对HSC中内源性TGF-β3分泌的影响[D];华中科技大学;2012年

6 谭蕾;CREB信号通路在氯胺酮致发育期大鼠海马神经毒性中的作用[D];华中科技大学;2009年

7 黄文晋;ERK1/2，，CREB和aczonin在神经系统中功能的初步研究[D];第四军医大学;2000年

8 曹根涛;人类基因CREB4和4.10的克隆和功能研究[D];复旦大学;2004年

9 谢敏;NR2B介导的泛素-蛋白酶体系统成分的功能障碍对CREB活性的影响[D];华中师范大学;2014年

10 江双红;CREB在氧诱导小鼠视网膜新生血管的作用及机制研究[D];武汉大学;2013年

中国硕士学位论文全文数据库 前10条

1 王培军;CREB在急性髓细胞白血病和骨髓增生异常综合征中的表达及其临床意义[D];华中科技大学;2011年

2 冯利飞;CREB3L1和PTN在人脑胶质瘤中的表达及临床意义[D];河北医科大学;2015年

3 宋娜娜;企鹅珍珠贝Creb基因克隆分析及黑色素合成抑制剂和增强剂对幼贝生长性状影响的研究[D];广东海洋大学;2015年

4 王雪;转录因子CREB在肾癌发生和转移中的作用及其分子机制研究[D];宁波大学;2015年

5 肖慧;转录因子CREB对TNFAIP1基因调控作用的研究[D];湖南师范大学;2015年

6 苏圣哲;转录因子CREB在根尖牙乳头干细胞定向分化中的作用[D];安徽医科大学;2016年

7 郭晓苇;针刺对痞满证肝郁模型大鼠脑CREB/ERK表达的影响[D];辽宁中医药大学;2016年

8 姜坤;右归丸对骨质疏松症大鼠骨、肾、下丘脑PKA、CREB及ATF4蛋白表达的影响[D];辽宁中医药大学;2016年

9 解靖;CREB在脑胶质瘤中的表达及敲除后对肿瘤细胞生物学特性的影响[D];河北大学;2016年

10 唐海斌;CREB在前列腺癌细胞增殖与凋亡中的作用[D];第四军医大学;2016年

本文编号：927383