拉莫三嗪通过诱导自噬降解BACE1的机制研究

发布时间：2017-10-06 04:41

  本文关键词：拉莫三嗪通过诱导自噬降解BACE1的机制研究

  更多相关文章： 拉莫三嗪 BACE1 阿尔茨海默症 自噬 mTOR

【摘要】：目的:研究拉莫三嗪促使BACE1降解的机制,为阿尔茨海默症的临床治疗提供新的理论支持。方法:利用三个月大的APP/PS1小鼠,通过连续喂养五个月的拉莫三嗪后,把小鼠杀掉取出脑袋,把海马和皮层分离开来,分别提取组织蛋白后,检测海马和皮层中BACE1、AKT、CREB蛋白水平的变化;在HEK-BACE1-293和CHO细胞系以及海马神经元原代细胞上加入不同浓度的拉莫三嗪进行药物处理,检测BACE1蛋白以及自噬相关蛋白AKT、m TOR、s6、CREB、LC3等蛋白水平的变化;在HEK-293细胞系上加入不同浓度的拉莫三嗪进行药物处理后,提取RNA,检测BACE1以及自噬相关基因Atg7含量的变化;在CHO细胞系上转染LC3-GFP质粒,加入不同浓度的拉莫三嗪处理后,利用激光共聚焦显微镜观察拉莫三嗪对自噬相关蛋白LC3形态变化的影响。结果:蛋白印迹实验结果表明拉莫三嗪能够使BACE1、p-m TOR以及p-s6的蛋白水平下调,p-AKT、p-CREB以及LC3II蛋白水平上调;PCR结果显示,拉莫三嗪对BACE1的m RNA水平没有影响,但是对自噬相关基因Atg7的m RNA水平具有上调作用;免疫荧光实验结果表明拉莫三嗪能够使LC3II点数增加。结论:我们通过本实验证明拉莫三嗪通过抑制m TOR信号通路来激活自噬来降低BACE1蛋白水平,为阿尔茨海默症的临床治疗提供新的理论依据。
【关键词】：拉莫三嗪 BACE1 阿尔茨海默症 自噬 mTOR
【学位授予单位】：苏州大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2015
【分类号】：R749.16
【目录】：

• 中文摘要4-5
• Abstract5-8
• 研究背景8-10
• 材料与方法10-20
• 1 实验材料10-13
• 1.1 主要试剂10-11
• 1.2 细胞株11
• 1.3 质粒11-12
• 1.4 动物12
• 1.5 实验仪器12-13
• 2 实验方法13-19
• 2.1 细胞的复苏13
• 2.2 细胞的传代13-14
• 2.3 细胞的转染14
• 2.4 神经元的分离、培养14-15
• 2.5 细胞免疫荧光和共聚焦技术15-16
• 2.6 Western blottin检测蛋白的表达16-18
• 2.7 PCR检测mRNA的表达18-19
• 3 统计方法19-20
• 结果20-32
• 1 拉莫三嗪能够降低BACE1的蛋白水平20-22
• 2 拉莫三嗪对BACE1的MRNA水平没有影响22-23
• 3 拉莫三嗪能抑制MTOR的信号通路23-25
• 4 拉莫三嗪能够激活CAMP效应元件结合蛋白（CREB）25-27
• 5 拉莫三嗪能够激活自噬27-29
• 6 3-MA能够消除拉莫三嗪对BACE1蛋白水平的下调作用29-32
• 讨论32-35
• 结论35-36
• 参考文献36-43
• 综述 阿尔茨海默病与自噬43-53
• 参考文献50-53
• 攻读学位期间公开发表的论文53-54
• 中英文对照缩略词表54-55
• 致谢55-56

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本文编号：980801