牙龈素通过C5a途径抑制LPS诱导的巨噬细胞向M1表型极化

发布时间：2017-10-13 18:14

  本文关键词：牙龈素通过C5a途径抑制LPS诱导的巨噬细胞向M1表型极化

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【摘要】：背景： 牙周炎是一种慢性感染性疾病，其发生发展涉及一系列的免疫炎症反应。巨噬细胞虽然在免疫炎症反应中起了重要作用，，但在组织破坏和骨吸收中也起到了不可忽视的作用，同时也在组织修复与重建中扮演重要角色，这一现象与巨噬细胞的极化状态密切相关。巨噬细胞在不同微环境的诱导下，可被极化为M1和M2型巨噬细胞，M1和M2型巨噬细胞分别发挥不同的促炎和抗炎作用。M1型巨噬细胞的主要特征为IL-12、IL-23、NO的高表达与IL-10的低表达；M2型巨噬细胞的主要特征为IL-12、IL-23、NO的低表达与IL-10、Arg-1的高表达。 牙龈卟啉单胞菌是牙周炎重要的致病菌之一，与牙周炎的发生、发展密切相关。该菌具有一系列逃避宿主防御机制及破坏宿主组织的毒力因子，包括牙龈素（gingipains）、脂多糖、菌毛和荚膜，他们影响组织细胞多种炎性介质的表达。目前文献对于LPS诱导巨噬细胞极化方面研究甚多，但关于牙龈素对于巨噬细胞极化方面的研究未见相关报道。因此本实验尝试在体外将LPS与牙龈素分别或共同作用于小鼠巨噬细胞后，研究其对巨噬细胞的极化影响，以期在巨噬细胞极化这一新角度，探索牙周炎治疗的新靶点。 方法： 1.牙龈素的制备： 丙酮沉淀P.g ATCC33277菌培养物上清，经重悬、透析提取牙龈素，以BAPNA为底物测定牙龈素活性，以10%SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳法(SDS-PAGE)鉴定提取牙龈素纯度及分子量。 2.实验分组： 实验共分为5组： 第一组：巨噬细胞单独培养组（空白对照组）； 第二组：LPS（1μg/ml）与巨噬细胞共培养组； 第三组：牙龈素（4U/L）与巨噬细胞共培养组； 第四组：LPS（1μg/ml）、牙龈素（4U/L）与巨噬细胞共培养组； 第五组：LPS（1μg/ml）、牙龈素（4U/L）、C5aRA(C5a受体拮抗剂，1mmol/L)与巨噬细胞共培养组。 3.巨噬细胞极化表型标志的检测： 上述各组细胞培养24h后，通过Realtime-PCR和ELISA方法检测巨噬细胞极化表型标志IL-10、IL-12、IL-23、NO在基因和蛋白水平的表达。 结果: 1.P.g ATCC33277牙龈素提取物经10%SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳分离出单一50kDa蛋白条带，主要为Rgp，底物发色法测定提取物活性值为16.70U／L。 2.Realtime-PCR和ELISA结果显示，LPS组IL-12、IL-23、NO表达较空白对照组明显增加（P＜0.05），LPS+牙龈素组IL-12、IL-23、NO表达较LPS组明显降低（P＜0.05），LPS+牙龈素+C5a受体拮抗剂组IL-12、IL-23、NO表达较LPS+牙龈素组明显增高（P＜0.05），各组IL-10的表达变化并没有统计学意义（P＞0.05）。 结论： 1.丙酮沉淀法可提取分子量50kDa Rgp； 2.在体外LPS可诱导巨噬细胞的M1表型极化； 3.牙龈素可抑制LPS诱导的巨噬细胞向M1表型极化； 4.牙龈素通过C5a途径抑制LPS诱导的巨噬细胞向M1表型极化。
【关键词】：牙龈卟啉单胞菌 牙龈素 脂多糖 巨噬细胞 极化
【学位授予单位】：吉林大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2015
【分类号】：R781.4
【目录】：

• 中文摘要4-6
• abstract6-10
• 英文缩略词表10-12
• 第1章 绪论12-18
• 1.1 前言12
• 1.2 文献综述12-18
• 1.2.1 巨噬细胞极化的分子机制12-14
• 1.2.2 巨噬细胞极化的表型特征14-15
• 1.2.3 牙龈卟啉单胞菌牙龈素与巨噬细胞极化15-16
• 1.2.4 巨噬细胞极化在牙周炎发生发展中的作用16-18
• 第2章 材料与方法18-27
• 2.1 材料18-21
• 2.1.1 主要试剂和仪器18-19
• 2.1.2 试剂配制19-21
• 2.2 实验方法21-27
• 2.2.1 牙龈素的提取21
• 2.2.2 牙龈素的鉴定21-23
• 2.2.3 实验分组23-24
• 2.2.4 Realtime-PCR 检测基因的表达24-25
• 2.2.5 ELISA 检测蛋白的表达25-26
• 2.2.6 统计学分析26-27
• 第3章 实验结果27-34
• 3.1 SDS-PAGE 凝胶电泳结果27
• 3.2 牙龈素活性测定结果27-28
• 3.3 Realtime PCR 结果28-31
• 3.3.1 Realtime PCR 检测 IL-12 mRNA 表达（图 3.4）28-29
• 3.3.2 Realtime PCR 检测 IL-23 mRNA 表达（图 3.5）29-30
• 3.3.3 Realtime PCR 检测 iNOS mRNA 表达（图 3.6）30
• 3.3.4 Realtime PCR 检测 iNOS mRNA 表达（图 3.7）30-31
• 3.4 ELISA 检测结果31-34
• 3.4.1 ELISA 检测细胞培养液 IL-12 的含量（图 3.8）31
• 3.4.2 ELISA 检测细胞培养液 IL-23 的含量（图 3.9）31-32
• 3.4.3 ELISA 检测细胞培养液 NO 的含量（图 3.10）32-33
• 3.4.4 ELISA 检测细胞培养液 IL-10 的含量（图 3.11）33-34
• 第4章 讨论34-38
• 第5章 结论38-39
• 参考文献39-41
• 作者简介及在学期间所取得的科研成果41-42
• 致谢42

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1 叶天星,曹雪涛;巨噬细胞作用的新概念:正反两面性[J];国外医学(免疫学分册);1990年02期

2 彭则;呼吸道细菌感染及在巨噬细胞上的信息传递途径[J];国外医学.呼吸系统分册;1999年01期

3 付平,许国章;巨噬细胞与肾损伤[J];国外医学.泌尿系统分册;2000年06期

4 夏飞,刘胜武,魏雅稚,肖凌;结核分枝杆菌诱导宿主巨噬细胞凋亡机制初探[J];中华微生物学和免疫学杂志;2005年06期

5 葛晶;成蓓;;过氧化物酶体增殖体激活受体和肝X受体对巨噬细胞作用的研究进展[J];国外医学(老年医学分册);2006年01期

6 张凤;熊思东;;巨噬细胞的极化及其意义[J];细胞生物学杂志;2007年01期

7 韩君勇;李艳波;;不同压力对巨噬细胞ATP结合盒转运子A_1表达的影响[J];中国心血管病研究;2008年05期

8 熊思东;;疾病发病中的巨噬细胞极化:机制与作用[J];现代免疫学;2010年05期

9 吴虢东;张才军;王玲;吴磊;寸新华;曹霞;;抗结核天然药物筛选的巨噬细胞模型研究[J];昆明医学院学报;2010年11期

10 李丹;任亚娜;范华骅;;巨噬细胞的分类及其调节性功能的差异[J];生命科学;2011年03期

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1 宋盛;周非凡;邢达;;PDT诱导的凋亡细胞对巨噬细胞NO合成的影响[A];第七届全国光生物学学术会议论文摘要集[C];2010年

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3 宋盛;邢达;周非凡;;PDT诱导的凋亡细胞对巨噬细胞NO合成的影响[A];第十一次中国生物物理学术大会暨第九届全国会员代表大会摘要集[C];2009年

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5 洪敏;余黎;华永庆;朱荃;;雌二醇激活巨噬细胞及内异症药物效应靶点的研究[A];中国药理学会第八次全国代表大会暨全国药理学术会议论文摘要汇编[C];2002年

6 唐澜;王丽;付度关;赵勇;曾和松;;瘦素对巨噬细胞白介素-1表达的影响[A];中华医学会心血管病学分会第八次全国心血管病学术会议汇编[C];2006年

7 郭紫芬;袁皓瑜;郭琰;庹勤慧;廖端芳;;依泽替米贝通过调控基因表达抑制巨噬细胞内脂质蓄积[A];第七届海峡两岸心血管科学研讨会论文集[C];2009年

8 王少霞;李杨;杨蕾蕾;左红艳;刘肖;徐新萍;王德文;;极低频电磁场暴露对大鼠肺组织中巨噬细胞的影响[A];第十三届中国体视学与图像分析学术会议论文集[C];2013年

9 丁晨光;田普训;薛武军;郑瑾;段万里;赵艳龙;席敏;李杨;;Treg诱导巨噬细胞向M2型转化的作用研究[A];2013中国器官移植大会论文汇编[C];2013年

10 吕建新;金丽琴;袁谦;金晶;彭颖;李东;;巨噬细胞激活的标志物研究[A];新世纪 新机遇 新挑战——知识创新和高新技术产业发展（上册）[C];2001年

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1 通讯员 李静 记者 胡德荣;恶性肿瘤巨噬细胞未必皆“恶人”[N];健康报;2014年

2 兰克;以尝试用巨噬细胞治瘫痪[N];科技日报;2000年

3 薛佳;免疫系统——人体的“卫士”[N];保健时报;2009年

4 记者 胡德荣;铁泵蛋白“维稳”铁代谢作用首次阐明[N];健康报;2011年

5 侯嘉 何新乡;硒的神奇功能[N];中国食品质量报;2003年

6 唐颖 倪兵 陈代杰;巨噬细胞泡沫化抑制剂研究快步进行[N];中国医药报;2006年

7 刘元江;新发现解释肿瘤为何易成“漏网之鱼”[N];医药经济报;2007年

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9 左志刚;升血小板药使用注意[N];医药养生保健报;2007年

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8 叶金善;环氧化酶-2/前列腺素E_2在血管紧张素Ⅱ刺激巨噬细胞表达细胞外基质金属蛋白酶诱导因子中的作用[D];第三军医大学;2010年

9 闫坤;前列腺素E1对小鼠子宫巨噬细胞表型和功能活性的影响[D];河南师范大学;2011年

10 汪韶君;扇贝裙边糖胺聚糖对巨噬细胞脂蛋白代谢及脂蛋白受体表达的影响研究[D];青岛大学;2006年

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