TNF-α对大鼠舌黏膜创伤愈合及其过程中上皮间质转化的影响

发布时间：2017-11-03 10:38

  本文关键词：TNF-α对大鼠舌黏膜创伤愈合及其过程中上皮间质转化的影响

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【摘要】：背景与目的口腔黏膜是人体中防止外界有害刺激的的屏障,可以保护上皮的功能完整,而且还具有感觉功能。目前很多因素都会造成口内黏膜的创伤(包括意外事故、手术、烫伤、不明原因的口腔溃疡、不良修复体以及正畸附件等引起的口腔黏膜创伤等)。口腔黏膜的创伤不仅带给患者身体上的疼痛,影响正常的生理功能(如咀嚼、语言及吞咽),还有可能造成心理上的障碍,但是当前临床上治疗口腔黏膜创伤多以消炎止痛抗感染为主,缺乏促进创伤快速愈合的药物。因此如何快速有效地促进患者口腔黏膜创伤愈合成为我们研究的重点。近年来对于生长因子在皮肤创伤愈合的作用成为大家关注的焦点,其中一些生长因子已经被用于临床来促进创伤的愈合,而且取得了很好的效果。目前关于肿瘤坏死因子-α(tumor necrosis factorα,TNF-α)对皮肤创伤愈合影响的研究则存在着异议,关于其在口腔黏膜中的研究鲜有报道,本研究拟初步探讨TNF-α在大鼠舌黏膜创伤愈合过程中的影响及作用机制。实验方法实验一:取60只8周龄Wistar大鼠,用直径为3mm的皮肤活检器于其舌背部黏膜处作一圆形缺损模型,将大鼠随机分为TNF-α+凝胶实验组(TNF-α的浓度为20ng/ml)和空白凝胶对照组。两组大鼠分别再分为0h,24h,48h,72h和96h五个亚组各6只,每组大鼠分别于0h,24h,48h,72h和96h处死,通过HE染色,体外观察及计算分析对比两组大鼠舌黏膜创口愈合过程及创口面积变化。实验二:动物舌黏膜创伤模型制备及标本的采集同第一部分,标本冰冻切片通过免疫组织荧光法检测与上皮间质转化(epithelial-to-mesenchymal transition,EMT)相关蛋白E-钙黏蛋白(E-cadherin,E-cad),成纤维细胞特异性蛋白-1(Fibroblast specific proteins,FSP1)和波形蛋白(Vimentin)在两组大鼠舌黏膜创伤愈合过程中的表达。实验三:在六孔板体外培养人类口腔永生化上皮细胞(HIOEC),分为TNF-α组和空白对照组两组各两个孔,作划痕实验并分别于0h,24h,48h和72h拍照来观察比较TNF-α组上皮细胞形态的变化和其对划痕愈合速度的影响。结果实验一:标本测量和HE染色结果具有一致性,均显示术后24h,48h,72h及96h TNF-α凝胶实验组愈合快于空白对照组(P0.001);实验二:免疫荧光结果显示在24h,48h,72h和96h创伤部位上皮中表达间质细胞表型Vimentin和FSP1的细胞数目TNF-α凝胶实验组较对照组明显增加,有显著性差异(P0.05);实验三:细胞划痕验中发现TNF-α组HIOEC细胞形态发生间质样改变,相对空白组,TNF-α组划痕愈合速度更快,在72h时细胞已经长满划痕区。结论TNF-α可以促进舌黏膜创伤的愈合;大鼠舌背部黏膜创伤愈合过程中发生了EMT现象并且TNF-α能够促进大鼠舌黏膜创伤愈合过程中EMT的发生;另外TNF-α可以体外诱导口腔上皮细胞发生EMT、能够使体外培养的上皮细胞迁移能力增强。然而TNF-α对大鼠舌黏膜创伤愈合的促进作用是否与EMT的发生有关需要进一步研究证明。
【关键词】：创伤愈合 舌黏膜 上皮间质转化 TNF-α
【学位授予单位】：安徽医科大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2016
【分类号】：R781.57
【目录】：

• 主要英文缩写词表5-6
• 摘要6-8
• Abstract8-11
• 实验一 TNF-α 对大鼠舌黏膜的创伤愈合的影响11-22
• 1 前言11
• 2 材料和方法11-15
• 3 结果15-17
• 4 讨论17-22
• 实验二 TNF-α 对大鼠舌黏膜创伤愈合过程中上皮间质转化的影响22-30
• 1 前言22
• 2 材料和方法22-25
• 3 结果25-27
• 4 讨论27-30
• 实验三 TNF-α 对体外培养的人类口腔永生化上皮细胞的影响30-34
• 1 前言30
• 2 材料和方法30-33
• 3 结果33
• 4 讨论33-34
• 结论34
• 参考文献34-38
• 个人简介38
• 致谢38-39
• 文献回顾/综述39-46
• 参考文献43-46

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本文编号：1135865