DDM异位成骨过程中BMP-2表达的实验研究

发布时间：2017-11-18 20:20

  本文关键词：DDM异位成骨过程中BMP-2表达的实验研究

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【摘要】：目的：通过异位成骨实验和免疫组化方法,分析骨形态发生蛋白(bone morphogenetic protein, BMP)在脱矿牙本质基质(decalcif icated dentin matrix, DDM)成骨中的作用。方法：将体重为2.0～2.5kg的新西兰大白兔24只随机分为8组,每组3只。采用标准兔饲料喂养,饮水量不限。每兔在背部竖脊肌两侧备4个肌袋,左右各二。在一侧的2个肌袋内植入成品DDM(为成品DDM组)；分别在另一侧的两个肌袋内植入自制DDM(为自制DDM组)和少许缝线(为对照组)。术后1、2、3、4、6、8、12、16周时取材,利用免疫组化及DAB染色鉴定含BMP-2的细胞。组织切片中胞质染为淡棕色至棕褐色为含BMP-2的阳性细胞。染色强度以多数细胞呈现的染色特性计分：无着色为0分,淡棕色为1分,棕色为2分,棕褐色为3分。阳性细胞百分比为400倍视野下计数100个细胞,其中阳性细胞所占的比例,取5个视野的平均值。染色结果半定量分析：以染色强度乘以阳性细胞数百分比来做为含BMP-2的阳性细胞表达率。实验数据应用SPSS17.0软件进行统计分析。结果：1、大体观察实验动物在实验过程中均无死亡,全部进入观察。术后2小时创口未见渗出,缝线固定有效。术后1天,大兔活动自如,饮食正常,正常排便；未见DDM排异体外。术后2周,兔脊背缝线处创口血痂继续脱落,创口逐渐愈合。术后16周,兔创口被新生毛发生长完全覆盖,兔行动、饮食完全正常。2、免疫组化染色成品组1周时出现含BMP-2的细胞,染色为浅棕色,染色面积较小。2周时,棕染色面积和强度略有增加。3、4周时染色为棕色或者深棕色,染色面积在第4周时达到最大值。6、8周染色为棕色或者浅棕色,但是染色面积有所下降。12周,染色为浅棕色或棕色,染色面积继续下降。16周时染色为浅棕,面积最低。棕染区域第1周时出现在DDM周围,随着时间推移,棕染区渐渐远离DDM。自制组1周时出现含BMP-2的细胞,染色为浅棕色。棕染部分出现在DDM周围。2周时,棕染区面积增大,颜色较浅。棕染部分逐渐远离DDM中心。3、4周时,棕染区面积达到最大,颜色深棕色。棕染部分出现在远离DDM处。6、8、12、16周染色强度和面积渐渐减少。对照组1周时未见明显棕染部分,仅见苏木素染色的肌细胞核出现,随着时间推移2、3、4周时,未见明显变化。6、8、12、16周切片中仅出现蓝染的肌细胞核。3、SPSS统计软件结果成品组和自制组从第1周起均出现了BMP-2的阳性表达。每周表达强度不同,从第1周开始逐渐增加至第4周,第6、8、12、16周慢慢下降。各时间点之间,差异有统计学意义(P0.05)。对照组各周均未出现明显的阳性表达,各时间点之间,没有明显差异。三组每周含BMP-2的细胞百分比与染色强度的乘积如下(X±S)：成品组：0.0289±0.0088、0.0427±0.0050、0.0709±0.0102、0.1136±0.0146、0.0380±0.0063、0.0125±0.0012、0.0035±0.0016、0.0029±0.0007；自制组0.0231±0.0142、0.0237±0.0020、0.0518±0.0042、0.0599±0.0086、0.0272±0.0051、0.0053±0.0006、0.0027±0.0005、0.0055±0.0033；对照组0.0009±0.0014、0.0002±0.0002、0.0004±0.0003、0.0006±0.0004、0.0003±0.0002、0.0006±0.0003、0.0003±0.0002、0.0001±0.0002。成品组阳性率表达高于自制组,高于对照组。三组之间的差异有统计学意义(P0.05)。结论：1.成品DDM和自制DDM异位植入兔竖脊肌后,均未出现免疫排斥、组织炎症等现象,表明DDM具有较好的生物相容性。2.成品DDM和自制DDM组,在不同时间点均能检测出BMP一2,且远远高于对照组,表明DDM在植入机体后,能够提高局部的BMP-2含量。3.成品DDM组BMP-2的阳性表达高于自制DDM组,说明DDM的制备工艺对BMP-2的活性及释放有着重要的影响。
【学位授予单位】：昆明医科大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2015
【分类号】：R783

【参考文献】

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1 张鸣号;彭亮;曹军;;显微图像分析法与人工计数法在免疫组化结果判读中的应用[J];宁夏医科大学学报;2009年02期

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本文编号：1201046