促红细胞生成素对牙髓干细胞向神经节样细胞诱导分化的作用研究

发布时间：2017-12-17 02:25

  本文关键词：促红细胞生成素对牙髓干细胞向神经节样细胞诱导分化的作用研究

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【摘要】：研究背景:视网膜神经节细胞(retinal ganglion cell,RGC)是形成视觉的重要组成部分。众多致盲性眼病如青光眼等,会引起神经节细胞损伤或进行性凋亡。为了解决这一临床问题,国内外学者将研究焦点聚集于干细胞。干细胞是一类具有自我更新和多向分化潜能的细胞。研究表明将这类有多向分化潜能的干细胞给予特定的诱导条件,可使其分化成具有神经节细胞功能的类神经节细胞,有望代替受损的神经节细胞完成视路,从而达到恢复患者视功能的目的。但由于目前诱导能力有限,仍需更强的诱导因子。促红细胞生成素(erythropoietin,EPO)是一种由肾皮质和肝脏分泌的激素样物质。它不仅可以促进局部细胞的生长,而且作为中枢神经系统重要的神经营养因子,它具有促进神经发育、促进损伤神经再生及保护神经的作用。但其在诱导干细胞成神经分化过程中的作用尚未见报道。基于牙髓干细胞取材容易、来源丰富等特点,我们拟研究EPO对牙髓干细胞向神经节细胞分化的作用。目的:研究EPO对牙髓干细胞成神经分化的作用,并初步探讨其机制。方法:收集完整拔除的健康成年人阻生第三磨牙,经过灭菌处理后,在无菌条件下,劈开牙冠,取出牙髓。经充分冲洗、剪碎和消化后,获得原代牙髓干细胞单细胞悬液。将细胞置于20%胎牛血清的DMEM高糖培养基中培养,培养至第3代,接种于6cm培养皿。将细胞分为四组:DMEM/F12组、DMEM/F12+EPO组、视网膜色素上皮细胞条件诱导液组、视网膜色素上皮细胞条件诱导液+EPO组,每3天换一次液,待细胞生长至70-80%融合时(或接种24-48小时后),加入视网膜色素上皮细胞条件分化液进行诱导。在特定的时间点,进行相关实验。首先,通过倒置显微镜观察细胞的形态;再通过MTT法测定牙髓干细胞诱导过程中细胞的生存能力;最后通过Real-Time PCR技术检测神经细胞标志基因Map2、Hes1和Atoh7的表达,进一步探讨EPO在牙髓干细胞向神经节样细胞分化过程中的作用和机制。结果:分离培养的牙髓干细胞主要呈长梭形,部分有1-2个突起,分布均匀;诱导3天后,在倒置显微镜下可观察到部分牙髓干细胞形态开始发生变化,细胞变圆,出现突起,呈现类神经细胞形态;通过MTT法,发现视网膜色素上皮细胞条件诱导液+EPO组细胞生存能力与视网膜色素上皮细胞条件分化液组的生存能力相似,两组间无统计学差异;Real-Time PCR结果提示:在第7天,与DMEM/F12组相比,视网膜色素上皮细胞条件诱导液组、视网膜色素上皮细胞条件诱导液+EPO组,Map2、Hes1、Atoh7基因的表达均有显著提高,差异有统计学意义(p0.05)。且视网膜色素上皮细胞条件分化液+EPO组的基因表达高于视网膜色素上皮细胞条件分化液组,Map2和Atoh7基因差异有统计学意义(p0.05)。结论:EPO可以促进牙髓干细胞向神经节样细胞分化。
【学位授予单位】：吉林大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2016
【分类号】：R781

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本文编号：1298401