牙周炎对肥胖小鼠肾组织的结构及炎症因子表达的影响研究

发布时间：2017-12-23 05:25

本文关键词：牙周炎对肥胖小鼠肾组织的结构及炎症因子表达的影响研究　出处：《郑州大学》2016年硕士论文　论文类型：学位论文

【摘要】：【目的】(1)建立肥胖合并牙周炎的小鼠模型。(2)检测分析模型小鼠各组体内血清炎症因子TNF-α、IL-1β、IL-6的表达情况。(3)观察分析牙周炎对肥胖模型小鼠的肾组织结构,肾组织炎症因子表达的影响。【方法】第一章(1)C57BL/6J小鼠44只随机分为两组,其中一组为高脂饲料组(HF)行高脂饲料喂养,另一组为低脂饲料组(LF)行低脂饲料喂养,每组小鼠各22只。(2)饲养至16周时,两组分别随机选取11只小鼠以牙龈卟啉单胞菌丝线对小鼠上颌双侧第二磨牙进行真性结扎,余下小鼠行假性结扎。结扎时间为10天,随后实验模型小鼠演变为四组:单纯肥胖组(HFC),肥胖复合牙周炎组(HFP),单纯牙周炎组(LFP),对照组(LFC)。(3)在小鼠饲养的过程中每周以及结扎后处死时测量汇总所有小鼠的体重数据,应用单因素方差分析来比较高脂饲料组(HF)与低脂饲料组(LF)小鼠体重的差异,以评估小鼠肥胖模型的建立情况以及肥胖模型的维持情况。(4)结扎10天处死所有的小鼠以获取模型小鼠的上颌骨组织并进行脱钙和包埋切片,随后对小鼠上颌骨切片进行HE染色,定性观察分析真性结扎组与假性结扎组小鼠牙周组织的差异,以评估小鼠牙周炎模型的建立情况。第二章单眼球取血法获取小鼠血液,蛋白芯片法检测各组小鼠血清内炎症因子TNF-α,IL-1β,IL-6表达水平的差异。第三章(1)结扎10天后处死小鼠,获取小鼠左右两侧肾组织并称重。(2)荧光定量PCR检测模型小鼠肾组织内炎症因子TNF-α,IL-1β,IL-6的mRNA的表达。(3)将获取的小鼠肾组织制作成切片并行HE、Masson染色以及炎症因子IL-1β的免疫组织化学染色,以观察牙周炎对肥胖模型小鼠的肾组织结构和肾组织内炎症因子表达水平的影响。【结果】第一章(1)0周时,高脂饲料组(HF)与低脂饲料组(LF)的小鼠体重无统计学差异(F=0.864,P0.05);One-way ANOVA显示:从饮食诱导第1周开始,高脂饲料组(hf)的小鼠体重大于低脂饲料组(lf)的小鼠体重,并有统计学意义(p0.01)。第16周时高脂饲料组与低脂饲料组相比,高脂饲料组小鼠体重较低脂饲料组小鼠增加约13.4g(43.5%),差异具有统计学意义(p0.01)。(2)各组小鼠丝线结扎后第10天,低脂饲料组(lf)的体重下降了约9.7%(3g),高脂饲料组(hf)的体重下降16.1%(7.1g)。第16周结扎前的高脂饲料组(hf)小鼠体重较同期低脂饲料组(lf)高约43.5%(13.4g),差异具有统计学意义(p0.001);而结扎后第10天高脂饲料组(hf)小鼠的体重仍较同期低脂饲料组(lf)高约33.5%(9.3g),差异仍具有统计学意义(p0.001)。以上结果表明,为期10天的丝线结扎过程中,高脂饲料组(hf)与低脂饲料组(lf)小鼠体重均降低,但小鼠在丝线结扎10天后高脂饲料组(hf)小鼠的体重仍高于低脂饲料组(lf)约33.5%。根据体重超过对照组10g或20%为显性肥胖的标准,模型小鼠仍处于显性肥胖的状态。(3)100倍镜下,肥胖复合牙周炎组(hfp)与单纯牙周炎组(lfp)均表现为:牙龈乳头萎缩,牙龈上皮根向移位,牙槽嵴顶吸收;单纯肥胖组(hfc)与对照组(lfc)均表现为:牙龈乳头完整,牙龈上皮无明显移位,牙槽嵴顶无明显吸收;200倍镜下发现肥胖复合牙周炎组(hfp)与单纯牙周炎组(lfp)牙槽骨内均可见呈点状分布的破骨细胞;单纯肥胖组(hfc)与对照组(lfc)均未见明显的破骨细胞分布。第二章(1)对于tnf-α,肥胖和牙周炎的交互效应无统计学意义(f=0.061,p=0.806)。不同饲料组的tnf-α的血清浓度差别无统计学意义(f=1.904,p=0.173),不同结扎组的tnf-α的血清浓度差别有统计学意义(p0.001)。真性结扎组(p)的tnf-α血清浓度水平显著低于假性结扎组(c)(f=13.6,p0.001)。单因素方差分析显示,与单纯肥胖组(hfc)相比,肥胖复合牙周炎组血清炎症因子的tnf-α浓度显著降低,并有统计学差异(p0.05)。(2)对于il-1β,肥胖和牙周炎的交互效应无统计学意义(f=1.259,p=0.266)。不同饲料组、不同结扎组的il-1β的血清浓度差别均有统计学意义(p0.05)。高脂饲料组(hf)的il-1β血清浓度水平显著高于低脂饲料组(lf)(f=15.375,p0.001),真性结扎组(p)的il-1β血清浓度水平显著低于假性结扎组(c)(f=5.056,p=0.028)。单因素方差分析显示,单纯肥胖组(hfc)的il-1β血清浓度水平显著高于对照组(lfc)(f=11.045,p=0.002),也显著高于肥胖复合牙周炎组(hfp)(f=19.948,p0.001)。(3)对于il-6,肥胖和牙周炎的交互效应具有统计学意义(f=19.316,p0.001)。不同饲料组、不同结扎组的血清il-6浓度差别均有统计学意义(p0.05)。高脂饲料组(hf)的血清il-6浓度水平显著高于低脂饲料组(lf)(f=26.837,p0.001),真性结扎组的血清il-6浓度水平显著低于假性结扎组(f=12.4,p=0.001)。单因素方差分析显示,单纯肥胖组(hfc)的血清il-6浓度水平显著高于对照组(lfc)(f=22.841,p0.001),也显著高于肥胖复合牙周炎组(hfp)(f=16.715,p0.001)。第三章(1)对于结扎10天后小鼠肾组织重量,肥胖和牙周炎的交互效应无统计学意义(f=3.985,p=0.506)。不同饲料组的小鼠肾组织重量差别有统计学意义(p0.05)。高脂饲料组(hf)的小鼠肾组织重量显著高于低脂饲料组(lf)(f=18.2,p0.001)。t检验分析显示,单纯肥胖组(hfc)的小鼠肾组织重量显著高于对照组(lfc)(t=20.188,p=0.001)。(2)he染色:高脂饲料组(hf)小鼠的肾组织均表现为空泡性变,病变位置多位于肾小管管壁,肾小管上皮细胞肿胀,严重者可见肾小管形态结构消失;低脂饲料组(lf)小鼠肾组织结构分明,肾小管结构清晰,未见明显的肾组织结构变化。而单纯牙周炎组(hfp)小鼠肾组织与对照组(lfc)小鼠肾组织结构清晰,无明显结构上的差异。(3)masson染色:四组小鼠肾组织均未见明显的胶原纤维沉积。(4)对于肾脏内炎症因子tnf-α、il-1β和il-6的mrna的表达,肥胖和牙周炎的交互效应均无统计学意义(f=0.659,p=0.427;f=0.494,p=0.491;f=0.434,p=0.519),不同饲料组的tnf-α、il-1β和il-6的2-△△ct值差别均无统计学意义(f=0.498,p=0,49;f=0.298,p=0.484;f=0.066,p=0.396),不同结扎组的tnf-α、il-6的2-△△ct差别亦无统计学意义(f=0.244,p=0,627;f=0.377,p=0.547),而不同结扎组的il-1β的2-△△ct值差别有统计学意义(p0.001)。真性结扎组(p)的il-1β的2-△△ct值显著高于假性结扎组(c)(f=4.727,p=0.043)。t检验分析显示,两个饲料组,两个结扎组间炎症因子tnf-α、il-1β和il-6的2-△△ct值的差异均无统计学意义。(5)il-1β免疫组化染色:单纯肥胖组(hfc)、肥胖复合牙周炎组(hfp)、单纯牙周炎组(hfp)的小鼠肾组织内炎症因子il-1β表达量均较对照组(lfc)高。t检验分析显示,单纯牙周炎组(lfp)较对照组(lfp)肾组织内il-1β表达量显著升高(p0.005),而单纯肥胖组(hfc)、肥胖复合牙周炎组(hfp)的小鼠肾组织内炎症因子il-1β表达量无明显差异,但均高于对照组(lfc)。【结论】第一章肥胖复合牙周炎小鼠模型建立成功。第二章牙周炎可能有刺激小鼠血清TNF-α、IL-β、IL-6表达下调,肥胖可能有刺激小鼠血清IL-β、IL-6表达上调的作用。第三章(1)饮食诱导肥胖可能导致肾脏组织肥大,发生空泡样变。(2)牙周炎可能有刺激上调肾组织炎症因子IL-1β表达的作用。
【学位授予单位】：郑州大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2016
【分类号】：R781.42

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