机械牵张应力影响人牙周膜干细胞TAZ表达的实验研究

发布时间：2017-12-29 05:12

本文关键词：机械牵张应力影响人牙周膜干细胞TAZ表达的实验研究　出处：《昆明医科大学》2015年硕士论文　论文类型：学位论文

【摘要】：目的明确机械张应力对人牙周膜干细胞生物学特性的影响及张应力作用下TAZ的表达变化。方法1.人牙周膜干细胞的分离培养及鉴定将原代培养的牙周膜细胞制备单细胞悬液有限稀释原克隆化培养,分离得到PDLSCs,传代后的第3代PDLSC用于本实验研究,免疫荧光检测细胞表面分子STRO-1、CD146,流式细胞术测定细胞表面标志物CD14、CD29、CD44、 CD45、CD90,并进行成骨、成脂诱导,对分离培养的细胞进行鉴定。2.机械张应力对人牙周膜干细胞生物学特性的影响本实验采用Forcel四点弯曲细胞力学加载仪进行机械张应力加载,取第3代PDLSCs接种于加力板,爬片处理,实验组设置应变量3000μstrain,频率0.5HZ,加载时间段分别为30、60、180、360、720min,对照组不加力。通过流式细胞术分析细胞周期,以观察机械张应力作用后的不同时间段内PDLSCs增殖能力的变化；通过人牙周膜干细胞ALP酶活性的检测以及通过实时荧光聚合酶链反应(real-time PCR)检测PDLSCs成骨相关基因RUNX2 mRNA的表达,观察机械张应力作用对PDLSCs成骨分化能力的影响,通过PCR检测成脂基因PPARy mRNA的表达,观察机械张应力作用对PDLSCs成脂分化能力的影响。3.机械张应力对转录激活因子TAZ表达的影响收集加力30、60、180、360、720min后的细胞,观察TAZ的变化情况。结果1.人牙周膜干细胞的分离培养及鉴定有限稀释克隆化培养的PDLSCs,形态相似,均为梭形、不规则型,细胞为放射状或者旋涡状排列；免疫荧光和流式细胞术分析细胞表面分子显示所得细胞阳性表达间充质干细胞表面标志物STRO-1、CD146、CD29、CD44、 CD90,阴性表达内皮细胞表面标志物CD14、CD45。成骨诱导可见矿化结节形成,茜素红染色显示阳性结果；成脂诱导后可见细胞中脂滴形成。2.机械张应力作用下人牙周膜干细胞生物学特性的变化使用Forcel四点弯曲细胞力学加载仪进行机械张应力加载后,发现机械张应力加载180min和360min时,对PDLSCs增殖的促进作用最明显；PCR检测成骨相关基因ALP、RUNX2,成脂相关基因PP ARy mRNA的表达,发现机械张应力加载60min后开始增加,并且随时间的延长而增高,加力后180min,增加的幅度最大,此后增加幅度逐渐减弱。3.机械张应力作用下TAZ的变化收集加力后特定时间点的细胞,发现应力加载60min后,TAZ的表达开始增加,在随着加力时间的延长而增高。结论1.有限稀释法克隆化培养的PDLSCs具有干细胞自我更新及多向分化潜能。2.3000μstrain的机械张应力能够促进PDLSCs的增殖和多向分化能力,其促PDLSCs增殖分化能力的强弱与应力加载的时间相关,其中180min时促增殖分化效果最显著。3.3000μstrain的机械张应力能够增强转录共激活子TAZ的表达,表明TAZ参与机械张应力胞内力学信号的传递,影响牙周膜干细胞的分化。
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【学位授予单位】：昆明医科大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2015
【分类号】：R783.5

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