非综合征型唇腭裂易感基因TGFβ3、IRF6、MSX1在胚胎时期的表达研究

发布时间：2018-06-10 03:59

  本文选题：腭裂 + 维甲酸　； 参考：《石河子大学》2014年硕士论文

【摘要】：目的：观察非综合征型唇腭裂易感基因TGFβ3、IRF6、MSX1在小鼠胚胎唇和腭形成时期的表达情况，探索其在腭裂畸形中的作用机制，为后续实验及临床实验提供实验依据。 方法：1.建立维甲酸诱导小鼠腭裂模型，在C57BL/6N孕鼠第10个妊娠日(Gestationday,GD),实验组按照100mg/kg体重对孕鼠进行维甲酸一次性灌胃，对照组给予等体积植物油。分别于GD12天、GD13天、GD14天、GD15天，脱颈处死孕鼠，剖宫取胚鼠。 2.采用实时荧光定量PCR（quantitative real-time polymerase chain reaction, QRT-PCR）技术和免疫组化的技术方法检测TGFβ3、IRF6、MSX1基因在胚胎GD12天、GD13天、GD14天、GD15天mRNA和蛋白的表达和分布情况。 结果：1.mRNA表达：TGFβ3mRNA的表达量，实验组中各组与GD12天相比，其他各组均升高差异有统计学意义（p0.05），对照组中各组与GD12天相比，其他各组均升高差异有统计学意义（p0.05）；实验组与对照组相比，实验组均高于对照组，其中GD14天差异有统计学意义（p0.05）。IRF6mRNA的表达量，实验组中各组与GD12天相比，其他各组均升高差异有统计学意义（p0.05），对照组中各组与GD12天相比，其他各组均升高差异有统计学意义（p0.05）；实验组与对照组相比，除GD15天实验组高于对照组外，其他各组均低于对照组，其中GD14天差异有统计学意义（p0.05）。MSX1mRNA的表达量，实验组中各组与GD12天相比，其他各组均升高差异有统计学意义（p0.05），对照组中各组与GD12天相比，除GD13天降低，其他各组均升高，差异均无统计学意义；实验组与对照组相比，除GD15天外，实验组均高于对照组，其中GD13天、GD14天差异有统计学意义(p0.05)。 2.蛋白表达：TGFβ3蛋白表达，，实验组中各组与GD12天相比，其他各组均升高差异有统计学意义（p0.05），对照组中各组与GD12天相比，其他各组均升高差异有统计学意义（p0.05）；实验组与对照组相比，实验组均高于对照组，除GD13天外其他各组均差异有统计学意义(p0.05)。IRF6蛋白表达：实验组中各组与GD12天相比，其他各组均升高，除GD14天其他各组差异有统计学意义（p0.05），对照组中各组与GD12天相比，其他各组均升高，除GD15天其他各组差异有统计学意义（p0.05）。实验组与对照组相比，除GD15天实验组高于对照组外，其他各组均低于相应对照组差异有统计学意义（p0.05）。MSX1蛋白表达，实验组中各组与GD12天相比，其他各组均升高，除GD15天其他各组差异有统计学意义（p0.05），对照组中各组与GD12天相比，除GD14天升高差异无统计学意义，其他两组均降低差异有统计学意义（p0.05）；实验组与对照组相比，实验组均高于对照组，除GD12天其他个组差异有统计学意义（p0.05）。 结论：1.TGFβ3基因mRNA和蛋白表达水平的上调，可能与胚胎时期唇和腭的形成有关。 2.IRF6基因mRNA和蛋白在GD12～GD14天的低表达水平，异常调控腭突的生长发育，而导致唇腭裂的发生。 3.MSX1基因mRNA和蛋白的高表达水平，异常调控了腭突的生长发育，导致腭裂的发生。
[Abstract]:Objective : To investigate the expression of TGF - 尾3 , IRF6 , MSX1 in the development of mouse embryonic lips and palate by observing the expression of TGF - 尾3 , IRF6 and MSX1 in the development of mouse embryonic lips and palate , and to provide experimental basis for the follow - up experiment and clinical experiment .

Methods : 1 . To establish a model of mice with cleft palate induced by retinoic acid . The rats were given equal volume of vegetable oil on the 10th day of gestation ( Gestationday , GD ) in the experimental group . The control group was given equal volume of vegetable oil . GD12 , GD13 , GD14 , GD15 , pregnant rats were sacrificed .

2 . The expression and distribution of mRNA and protein in GD12 , GD13 , GD14 and GD15 were detected by quantitative real - time polymerase chain reaction ( QRT - PCR ) and immunohistochemistry .

Results : 1 . mRNA expression : TGF - 尾3 mRNA expression was significantly higher in the experimental group than that in GD12 ( p < 0.05 ) .
Compared with the control group , the experimental group was higher than that of the control group , among which GD14 had statistical significance ( p 0.05 ) . Compared with GD12 in the experimental group , the difference was statistically significant ( p < 0.05 ) .
In the experimental group , compared with the control group , all the other groups were lower than the control group except that the GD15 day group was higher than that of the control group , among which GD14 days had significant difference ( p < 0.05 ) . Compared with GD12 in the experimental group , the difference was statistically significant ( p < 0.05 ) .
Compared with the control group , the experimental group was higher than that of the control group , among which GD13 and GD14 had significant difference ( p < 0.05 ) .

2 . Protein expression : TGF - 尾3 protein expression , in the experimental group , the difference was statistically significant ( p < 0.05 ) compared with GD12 ( p < 0.05 ) , and in the control group , the difference was statistically significant ( p < 0.05 ) .
Compared with the control group , there was significant difference between the experimental group and the control group ( p < 0.05 ) . Compared with the control group , the other groups were higher than those in the control group ( p < 0.05 ) .
Compared with the control group , the experimental group was higher than that of the control group , and the difference between the experimental group and the control group was significantly higher than that in the control group ( p < 0.05 ) .

Conclusion : 1 . The up - regulation of TGF - 尾3 mRNA and protein expression may be related to the formation of lip and palate .

2 . The low expression level of IRF6 gene mRNA and protein in GD12 - GD14 could regulate the growth and development of palatine process , which could lead to cleft lip and palate .

3 . The high expression level of mRNA and protein of MSX1 gene regulates the growth and development of palate and leads to cleft palate .
【学位授予单位】：石河子大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2014
【分类号】：R782.21

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本文编号：2001897