两种体外方法评价不同根管封闭剂对临床分离粪肠球菌抗菌效果的研究

发布时间：2018-10-14 08:10

【摘要】：根管治疗的目的在于彻底清除感染物质与坏死组织,促进组织的修复与再生。然而以目前的根管预备和消毒方法,不能完全清除根管内的微生物;加之根管解剖的变异和复杂性,感染根管的细菌常存在于牙本质小管、根管侧枝等较隐匿的区域。这些细菌繁殖后会造成根管内的再感染,最终导致根管治疗的失败。因此,对于永久充填在根管内的封闭剂来说,不仅需要有良好的封闭性能来封闭根管的冠方和根方,还需要具有抗菌活性来杀灭根管内的残余细菌,提高根管治疗的成功率。因此,在根管充填中选用抗菌能力强的封闭剂,对于彻底预防再感染能起到关键的作用。随着口腔材料学的发展,许多新型根管封闭剂不断应用于临床,如Gutta Flow、i Root SP封闭剂等,其良好的生物相容性、严密的封闭性和便捷的操作性,使其在临床治疗中的应用日益广泛,但是其抗菌性能如何?和传统的封闭剂相比,其抗菌性能有何优势?值得我们分析研究。目前,研究封闭剂抗菌性的方法较多,如ADT、DCT、感染根管模型等,其具有各自优缺点,不同方法得出的抗菌效果是否一致?这也值得我们对比研究。本课题通过选用DCT和感染根管模型两种体外检测方法,对氧化锌丁香油(zinc oxide-euqenol,ZOE)、AH-Plus、Gutta Flow、i Root SP和Vitapex五种临床常用的根管封闭剂的抗菌效果进行研究分析,观察其对临床分离粪肠球菌(Enterococcus faecalis,E.f)的抗菌效果,并测定其流动性和p H值,以期为临床治疗的选择提供依据,也为设计更加完善的评价封闭剂抗菌性能的实验提供思路。实验分为以下四个部分:一、临床E.f的采集、分离和鉴定选取就诊于我科室的病例20例,均需要根管再治疗。采用粪链球菌培养基(Streptococcus Faecalis Medium,SF Medium)和胆汁七叶苷培养基对临床分离的菌株进行培养,通过观察颜色变化进行初步鉴定;鉴定为阳性结果的菌株利用BBL CRYSTAL系统进行细菌生化反应的鉴定;最后利用聚合酶链反应(polymerase chain reaction,PCR)和DNA纯化回收技术,鉴定细菌的16Sr RNA序列,并与基因库中的标准菌进行比对。结果显示,在收集的20例病例样本中,有6例分离鉴定出E.f,检出率为30%。本实验说明16Sr RNA和PCR扩增技术是目前临床中检测鉴定E.f的重要方法,其精确度明显大于传统的微生物培养法,确保了实验的准确性。二、利用DCT评价不同根管封闭剂的抗菌效果将ZOE、AH-Plus、Gutta Flow、i Root SP和Vitapex五种封闭剂均匀混合后放入离心管底部,阳性对照组选用凡士林。在新鲜混合(20min)和1d、3d、7d、14d时分别取出相应样本,与提前配制的E.f菌悬液充分接触1h,阴性对照组加入无菌去离子水。随后吸取菌液梯度稀释,厌氧培养并铺板计数,记录24h内五种封闭剂抗菌效果的变化。结果显示:生物陶瓷类封闭剂i Root SP和AH-Plus在新鲜混合时(20min)可以完全杀灭细菌,且i Root SP的抗菌能力可以维持7d(P0.05);ZOE、AH-Plus和Vitapex封闭剂在新鲜混合时(20min)具有较强的抗菌性(P0.05),但3d后抗菌性基本消失(P0.05);而Gutta Flow封闭剂则对临床分离的E.f没有抗菌效果(P0.05)。三、利用E.f感染根管模型评价不同根管封闭剂的抗菌效果收集单直根管人牙成功建立E.f感染根管模型,随机分为五个实验组(ZOE、AH-Plus、Gutta Flow、i Root SP和Vitapex)进行根管充填,并同时设置阳性、阴性对照组。分别在1d、3d、7d和14d时取出相应样本,利用球钻磨除充填材料和牙本质。收集粉末并进行梯度稀释,培养后细菌计数。结果显示:Gutta Flow封闭剂仍然对临床分离的E.f没有抗菌效果(P0.05),而其余封闭剂的抗菌性均可以维持到14d(P0.05),其抗菌时间较DCT实验中有所延长;ZOE、AH-Plus和Vitapex三种封闭剂的抗菌性在3d后基本上无变化(P0.05),而i Root SP在14d时抗菌性最强(P0.05),说明随着时间的延长,其抗菌性并没有减弱。据此得出初步结论:在评价封闭剂抗菌能力时,应根据各封闭剂的组成成分、物理化学特性,选择合适的方法进行测定。四、体外不同根管封闭剂流动性和p H值的测定五种封闭剂各自混合后放置在玻璃板中心位置,并将另一块玻璃板轻压于封闭剂表面,在其上放置120g砝码。10分钟后,取下覆盖于封闭剂上的玻璃板和砝码,用游标卡尺测量各封闭剂形成圆形图案的最大与最小直径,取其平均值。p H测定方法为:各封闭剂均匀涂抹在24孔板的孔底部,分别在混合后20min和1d、3d、7d、14d取出,将3ml去离子水加入到每个孔中,利用p H测试仪进行检测。结果显示:流动性由强到弱排序为i Root SPGutta FlowZOEAH-PlusVitapex;14d时p H由高到低的排列顺序为i Root SPVItapexAH-PlusGutta FlowZOE。结果显示p H值与封闭剂的抗菌能力有一定的相关性,但流动性与抗菌性无直接关联。综上所述,根管封闭剂的远期抗菌性能和其所含抗菌成分密切相关;同时,其他的物理化学性能均可以影响封闭剂的抗菌效果。
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【学位授予单位】：第四军医大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2015
【分类号】：R781.05

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