醋酸泼尼松龙对大鼠放射性口腔黏膜炎及口腔上皮β防御素表达的影响

发布时间：2018-10-18 09:50

【摘要】：目的:1、建立大鼠放射性口腔黏膜炎模型,为进一步研究提供动物模型基础。2、利用建好的大鼠放射性口腔黏膜炎模型,研究醋酸泼尼松龙对大鼠口腔上皮中β防御素(rBD2、rBD3)及MAPKp38、NF-κBp65、IL-1β、IL-6、TNF-α表达水平的影响,以初步探讨醋酸泼尼松龙影响β防御素的可能机制。方法:1、选取45只SD大鼠,随机分为9组;其中8组为实验组,用~(~(60))Coγ射线以35Gy剂量单次照射大鼠口鼻部;另1组为空白对照组,不作处理。每天观察大鼠舌黏膜状况,并对拒食的大鼠进行灌注流食喂养。分别于放射后1、3、5、7、10、14、21、28天处死一组实验组大鼠,对照组于28天处死,取舌黏膜组织进行HE染色和显微镜下观察。2、选取30只SD大鼠建立放射性口腔黏膜炎模型,随机分为醋酸泼尼松龙处理组(PA组)和生理盐水对照组(NS组)。在炎症初始期(放射后第5天),PA组:醋酸泼尼松龙注射液局部喷洒,每次约0.1ml(0.1mg),3次/d,共3d。NS组:生理盐水局部喷洒,每次约0.1ml(0.1mg),3次/d,共3d。每组在用药(或生理盐水)结束后的第1d、4d、7d分别处死5只大鼠,处死前观察每只大鼠的舌黏膜状况,取舌体组织,用免疫组织化学技术检测rBD2、rBD3、MAPKp38、NF-κBp65、IL-1β、IL-6、TNF-α在上皮中的表达水平,并用IPP6.0软件测量记录其平均光密度值。所得数据用SPSS20.0软件统计分析,各PA组和NS组的平均光密度值差异用析因设计的方差分析,组间差异比较采用两样本t检验,组内差异比较采用单因素方差分析,各检测因子之间表达水平的关系用pearson积差相关系数表示。结果:1、大鼠放射性口腔黏膜炎模型建立及观察结果:放射后5~6天,大鼠口腔黏膜出现红肿伴有小面积溃疡;7~8天小溃疡逐渐融合成大面积溃疡;并持续到9~13天;14天开始,溃疡逐渐缩小愈合;21~28天溃疡完全愈合。HE染色显示:放射后第5天,黏膜下层出现大量炎性细胞浸润,但上皮层连续完整;第7、10天,上皮层崩解、脱落;第14天溃疡底部可见新生肉芽组织及新生毛细血管;第21、28天,溃疡处有新的上皮组织出现,基底层排列紧密。2、醋酸泼尼松龙对放射性口腔黏膜炎及大鼠口腔上皮β防御素及部分相关因子表达水平的影响2.1醋酸泼尼松龙对大鼠放射性口腔黏膜炎的影响观察:结束用药(或生理盐水)的第1d,NS组中大鼠舌黏膜出现大面积的溃疡;而PA组中大鼠的舌黏膜同样出现了溃疡,但面积较NS组中小。第4d,NS组中大鼠舌黏膜溃疡持续;而PA组中溃疡周围出现愈合症状。第7d,NS组中大鼠舌黏膜溃疡周围出现愈合现象;而PA组中溃疡大部分愈合。2.2 rBD2的表达:上皮各层细胞胞质均可见rBD2着色。析因设计方差分析显示:PA组和NS组间rBD2染色平均光密度值有显著性差异(F=7.392,P=0.012),同组不同时间点之间有差异(F=7.016,P=0.004),组别和时间不存在交互效应(F=2.312,P=0.121)。组间比较t检验结果显示:7d,PA组大鼠口腔上皮组织的rBD2平均光密度值显著低于NS组(P=0.001)。组内比较方差分析结果显示:NS组中rBD2平均光密度值随时间先降低后升高(P=0.001)。2.3 rBD3的表达:上皮各层细胞胞质均可见rBD3着色。析因设计方差分析显示:PA组和NS组间rBD3染色平均光密度值有显著性差异(F=49.586,P0.001),同组不同时间点之间有差异(F=86.777,P0.001),组别和时间存在交互效应(F=76.~(60)4,P0.001)。组间比较t检验结果显示:4d、7d,PA组大鼠口腔上皮组织的rBD3平均光密度值显著低于NS组(4d:P=0.007,7d:P=0.018)。组内比较方差分析结果显示:PA组和NS组中,rBD3平均光密度值随时间一直降低(PA组:P0.001,NS组:P0.001)。2.4 MAPKp38的表达:上皮各层细胞胞质均可见MAPKp38表达。析因设计方差分析显示:PA组和NS组间MAPKp38染色平均光密度值差异有统计学意义(F=9.081,P=0.006),而同组不同时间点之间也有差异(F=45.062,P0.001),组别和时间存在交互效应(F=38.152,P0.001)。组间比较t检验结果显示:各时间点PA组和NS组见比较均有明显差异;在1d,PA组较NS组的MAPKp38平均光密度值有所增高(P0.001);而在4d和7d,PA组的MAPKp38平均光密度值较NS组低(4d:P=0.040,7d:P0.001)。组内比较方差分析结果显示:在PA组和NS组中MAPKp38平均光密度值随时间先降低后升高(PA组:P0.001,NS组:P0.001)。2.5 NF-κBp65的表达:上皮各层的细胞胞核和部分胞质均可见NF-κBp65表达。析因设计方差分析显示:PA组和NS组间NF-κBp65染色平均光密度值有明显差异(F=5.680,P=0.025),而同组不同时间点之间有差异(F=138.259,P0.001),组别和时间存在交互效应(F=41.801,P0.001)。组间比较t检验结果显示:在1d,PA组蛋白平均光密度值较NS组要高(P=0.001),而在4d和7d,PA组蛋白平均光密度值低于NS组(4d:P=0.021,7d:P0.001)。组内比较方差分析结果显示:在PA组中NF-κBp65蛋白平均光密度值随时间有降低的趋势(P0.001),而NS组中蛋白平均光密度值先降低后增高(P0.001)。2.6 IL-1β的表达:上皮各层细胞胞质均可见IL-1β表达。析因设计方差分析显示:PA组和NS组间IL-1β染色平均光密度值有显著性差异(F=5.014,P=0.035),同组不同时间点之间有差异(F=149.023,P0.001),组别和时间存在交互效应(F=5.251,P=0.013)。组间比较t检验结果显示:7d时间点PA组大鼠口腔上皮组织的IL-1β平均光密度值显著低于NS组(P0.001)。组内比较方差分析结果显示:IL-1β平均光密度值随时间有降低的趋势(PA组:P0.001,NS组:P0.001)。2.7 IL-6的表达:上皮各层细胞胞质均可见IL-6表达。析因设计方差分析显示:PA组和NS组间IL-6染色平均光密度值有显著性差异(F=21.821,P0.001),同组不同时间点之间差异无统计学意义(F=1.655,P=0.212),组别和时间存在交互效应(F=8.831,P=0.001)。组间比较t检验结果显示:4d、7d时间点PA组大鼠口腔上皮组织的IL-6平均光密度值显著低于NS组(4d:P=0.009,7d:P0.001)。组内比较方差分析结果显示:PA组中IL-6平均光密度值随时间有降低(P=0.002)。2.8 TNF-α表达:上皮各层细胞胞质均可见TNF-α表达。析因设计方差分析显示:PA组和NS组间TNF-α染色平均光密度值无明显差异(F=0.989,P=0.330),而同组不同时间点之间有差异(F=4.322,P=0.025),组别和时间不存在交互效应(F=1.401,P=0.266)。组间比较t检验结果显示:各时间点PA组和NS组见比较无明显差异。组内比较方差分析结果显示:在N S组中TNF-α平均光密度值随时间有降低的趋势(P0.001)。3、放射性口腔黏膜炎大鼠口腔上皮中β防御素(rBD2、rBD3)与MAPKp38、NF-κBp65及炎症因子(IL-1β、IL-6、TNF-α)之间平均光密度的相关关系:rBD2的表达与MAPKp38(r=0.554,P=0.002)呈正相关,与NF-κBp65(r=0.508,P=0.004)呈正相关,与IL-1β(r=0.552,P=0.002)呈正相关,与IL-6(r=0.427,P=0.018)呈正相关,但与TNF-α间无明显相关性(r=0.278,P=0.137)。rBD3的表达与MAPKp38间呈正相关性(r=0.554,P=0.002),与NF-κBp65(r=0.383,P=0.037)呈正相关,与IL-1β(r=0.538,P=0.002)呈正相关,与IL-6(r=0.503,P=0.005)呈正相关,但与TNF-α间无明显相关性(r=0.140,P=0.462)。结论:经~(60)Coγ射线照射35Gy可成功建立大鼠放射性口腔黏膜炎模型。在该模型中,醋酸泼尼松龙能减轻口腔黏膜炎的严重程度,降低口腔上皮中rBD2、rBD3和MAPKp38、NF-κBp65、IL-1β、IL-6的表达,MAPKp38、NF-κBp65信号通路可能在醋酸泼尼松龙对rBD2、rBD3的抑制作用中发挥一定的作用。
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【学位授予单位】：广西医科大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2017
【分类号】：R781.5

【参考文献】