颞下颌关节髁突软骨下骨及膝关节胫骨软骨下骨成骨细胞增殖与成骨能力的比较研究

发布时间：2018-11-15 16:33

【摘要】：[目的]1、建立SD大鼠乳鼠颞下颌关节髁突软骨下骨、膝关节胫骨软骨下骨体外分离培养成骨细胞的原代及传代培养模型；2、对来源于颞下颌关节髁突软骨下骨、膝关节胫骨软骨下骨的成骨细胞进行连续观察,探讨其生物学活性；3、进一步研究颞下颌关节髁突软骨下骨、膝关节胫骨软骨下骨来源的成骨细胞的增殖与成骨活性。 [方法]1、分别取颞下颌关节髁突软骨下骨、膝关节胫骨软骨下骨组织进行成骨细胞的培养,两种成骨细胞均采用Ⅰ型胶原酶消化法进行原代培养,并采用“差速贴壁法”进行两种细胞的纯化培养,在倒置显微镜下连续观察两种成骨细胞的生长状况、形态学和生物学特性；2、通过HE染色、ALP染色、钙化结节茜素红S染色,鉴定两种不同来源第4代成骨细胞；3、采用细胞计数、MTT生长曲线及流式细胞周期的测定来比较两种不同来源成骨细胞的增殖能力；4、通过检测碱性磷酸酶(alkaline phosphatase, ALP)、骨钙素(osteocalcin, OC)和Ⅰ型胶原(collagen I, COL-I) mRNA的表达量,比较两种不同来源成骨细胞的成骨能力。 [结果]1、两种不同来源成骨细胞培养形态无明显差别,大约培养24h后即可贴壁、伸展,贴壁时细胞均较小,呈星形、三角形及短梭形,胞核不明显,随着细胞生长分化,细胞表面有突触并相互之间连结,彼此间融合后向多层生长。传代生长至第4代时,细胞形态胞体大,形态以多角形、长梭形为主,胞核明显增大,同时细胞外基质分泌增多,并包裹细胞,继而形成细胞团块,透光性减弱,最终形成钙结节,符合成骨细胞的生长特性； 2、两种不同来源成骨细胞HE染色、ALP染色、钙化结节茜素红S染色呈现强阳性反应,经鉴定为成骨细胞； 3、细胞计数显示颞下颌关节髁突软骨下骨成骨细胞量明显低于膝关节胫骨软骨下骨成骨细胞量,差异有统计学意义(p0.05); MTT生长曲线结果显示,颞下颌关节髁突软骨下骨成骨细胞在接种后4d进入对数生长期,第8d达到峰值,此后进入平台期及生长衰减期,膝关节胫骨软骨下骨成骨细胞在接种后3d进入对数生长期,第7d达到峰值,此后进入平台期及生长衰减期；流式细胞生长周期结果显示,颞下颌关节髁突软骨下骨成骨细胞G0/G1期比例为62.90±3.15%,膝关节胫骨软骨下骨成骨细胞G0/G1期比例为52.10±5.24%,差异有统计学意义(p0.05)；颞下颌关节G2/S/M期比例为37.10±2.15%,膝关节G2/S/M期比例为47.90±3.24%,差异有统计学意义(p0.05) 4、在同一时间颞下颌关节髁突软骨下骨成骨细胞ALP、COL-I的表达量较膝关节胫骨软骨下骨成骨细胞高,差异有统计学意义(p0.05)；在同一时间颞下颌关节髁突软骨下骨成骨细胞OC的表达量较膝关节胫骨软骨下骨成骨细胞低,差异有统计学意义(p0.05)；在不同时间颞下颌关节髁突软骨下骨成骨细胞组内及膝关节胫骨软骨下骨成骨细胞组内ALP的表达含量随着培养时间的延长逐渐降低,而COL-I、OC则相反,表达量逐渐升高,差异有统计学意义(p0.05)； [结论]1、来源于SD大鼠乳鼠颞下颌关节髁突软骨下骨及膝关节胫骨软骨下骨的原代细胞,经体外培养均可得到均一性好、具有典型成骨细胞形态特征的成骨细胞； 2、两种不同来源的细胞经鉴定为成骨细胞； 3、本实验细胞计数、MTT及流式细胞周期结果显示颞下颌关节髁突来源的软骨下骨成骨细胞增殖能力低于膝关节胫骨来源的软骨下骨成骨细胞； 4、本实验ALP、COL-I定量检测结果颞下颌关节髁突软骨下骨成骨细胞成骨能力在ALP、COL-I方面强于膝关节胫骨软骨下骨成骨细胞,这与两种关节成骨细胞增殖能力比较的结论相反,呈反比关系；而OC的检测结果提示颞下颌关节髁突软骨下骨成骨细胞成骨能力在OC方面弱于膝关节胫骨软骨下骨成骨细胞,可能的原因是OC的表达和成骨细胞的数目及增殖状态呈正相关,颞下颌关节来源的成骨细胞增殖活性弱于膝关节来源的成骨细胞,故颞下颌关节来源的成骨细胞OC成骨表达能力低于膝关节来源成骨细胞的OC表达能力。
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【学位授予单位】：昆明医科大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2014
【分类号】：R782.6

【参考文献】