脂多糖诱导牙髓细胞DNA双链断裂的研究

发布时间：2018-12-29 08:07

【摘要】：目的:探讨低剂量条件下脂多糖诱导牙髓细胞DNA损伤方法,为研究脂多糖诱导牙髓细胞DNA双链断裂及DNA修复提供实验模型。方法:10μg/L脂多糖连续刺激牙髓细胞1、3、6次后,采取MTT及TUNEL分别检测其对牙髓细胞增殖及凋亡的作用;采用q-PCR及免疫印迹检测γ-H2A.X的mRNA及蛋白水平的表达;使用免疫荧光及免疫组化法观测γ-H2A.X在体内、外牙髓细胞的表达。结果:与对照组相比,10μg/L脂多糖连续刺激对牙髓细胞增殖及凋亡均无显著性差异;脂多糖连续刺激6次后细胞免疫荧光显示在细胞核检测到γ-H2A.X的阳性表达,且蛋白及mRNA水平的表达较对照组有显著性增加(P0.05);免疫组化结果表明在脂多糖诱导4、6、8d后,γ-H2A.X在大鼠牙髓组织较对照组表达水平显著升高(P0.05)。结论:低剂量脂多糖连续刺激可诱导牙髓细胞产生DNA双链断裂。
[Abstract]:Objective: to investigate the method of DNA damage induced by lipopolysaccharide (LPS) in dental pulp cells at low dose, and to provide an experimental model for the study of DNA double strand break and DNA repair in dental pulp cells induced by lipopolysaccharide. Methods: after 10 渭 g / L lipopolysaccharide was stimulated for 6 times, the proliferation and apoptosis of dental pulp cells were detected by MTT and TUNEL, and the expression of mRNA and protein of 纬-H2A.X were detected by q-PCR and Western blot. The expression of 纬-H2A.X in dental pulp cells in vivo and in vitro was observed by immunofluorescence and immunohistochemistry. Results: compared with the control group, there was no significant difference in proliferation and apoptosis of dental pulp cells stimulated by 10 渭 g / L lipopolysaccharide. After 6 consecutive lipopolysaccharide stimulation, the positive expression of 纬-H2A.X was detected in the nucleus, and the expression of protein and mRNA was significantly higher than that of the control group (P0.05). The immunohistochemical results showed that the expression level of 纬-H2A.X in dental pulp of rats was significantly higher than that of the control group (P0.05) 8 days after lipopolysaccharide induction. Conclusion: continuous stimulation of low dose lipopolysaccharide can induce DNA double strand break in dental pulp cells.
【作者单位】： 武汉大学口腔医学院牙体牙髓二科;
【基金】：国家自然科学基金(编号:81120108010、81571438) 湖北省自然科学基金(编号:ZRY2014000940)
【分类号】：R781

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本文编号：2394559