牵张应力对人牙周膜细胞NF-κB信号通路的影响及其与MMP-2表达的关系

发布时间：2019-04-10 10:50

【摘要】：目的：通过胶原酶消化法体外分离培养人牙周膜细胞并构建细胞牵张应力加载模型，研究牵张应力对人牙周膜细胞NF-κB信号通路的影响及其与MMP-2表达的关系. 方法：①胶原酶消化法体外分离培养人牙周膜细胞，观察人牙周膜细胞生物学特性，免疫组织化学对细胞进行抗角蛋白及抗波形蛋白抗体检测判定其来源，并构建细胞牵张应力加载模型。 ②选取4-6代细胞，对细胞施加不同时间的12%周期性牵张应力，结合信号通路抑制剂及蛋白印迹的检测方法，研究不同应力条件对人牙周膜细胞NF-κB、IκB、 MMP-2蛋白的表达、IKK激酶的活性及磷酸化水平的影响，及MMP-2在人牙周膜细胞中表达的可能的信号转导通路。 结果：①胶原酶消化法体外成功分离培养人牙周膜细胞，免疫组织化学鉴定其来源可靠；应用多通道细胞牵张应力加载系统成功构建人牙周膜细胞体外培养-力学刺激模型。 ②蛋白印迹结果显示：人牙周膜细胞受到12%形变率的周期性牵张应力作用时，，NF-κB信号通路被激活， p-IKK磷酸化程度升高，与对照组相比均具有显著性差异（P0.05）。PDTC组, NF-κB蛋白、p-IKK表达明显降低，与12h组相比具有显著性差异（P0.05）。对照组胞浆I-κBα蛋白有较强的表达，加力后，胞浆I-κBα蛋白发生磷酸化并降解表达显著降低与对照组相比具有显著差异（P0.05），加入PDTC后，胞浆I-κBα蛋白表达增加，与12h相比差异有统计学意义（P0.05）。 ③蛋白印迹结果显示：当牙周膜细胞受到12%形变率的周期性牵张应力作用时，MMP-2蛋白的表达增加，与对照组相比具有显著性差异（P0.05），12h时MMP-2蛋白表达最高。NF-κB通路抑制剂PDTC可抑制机械牵张应力作用下牙周膜细胞MMP-2表达的增加，与单纯加力组相比差异具有统计学意义（P0.05）。 结论：①采用胶原酶消化法成功的分离培养人牙周膜细胞并构建hPDLCs-力学刺激模型。 ②12%形变率的周期性牵张应力作用于牙周膜细胞时，NF-κB通路被激活，胞浆I-κBα蛋白表达水平的降低，I-κBα降解是NF-κB信号通路激活的机制之一。 ③12%形变率的周期性机械牵张应力可诱导人牙周膜细胞MMP-2的表达增加，从而影响牙周组织细胞外基质代谢同时机械牵张应力可通过NF-κB通路影响MMP-2蛋白的表达。
[Abstract]:Aim: to study the effect of distraction stress on the NF- 魏 B signaling pathway of human periodontal ligament cells and its relationship with the expression of MMP-2 in vitro by collagenase digestion and to construct a model of tensile stress loading in human periodontal ligament cells. Methods: human periodontal ligament cells were cultured by collagenase digestion in vitro and the model of tensile stress loading was constructed. 鏂规硶: 1 鑳跺師 閰

本文编号：2455739