实验性咬合紊乱对大鼠髁突软骨中Sox9、PTHrP及其受体PTH1R表达的影响

发布时间：2020-03-21 05:58

【摘要】： 本课题组前期研究结果表明,实验性咬合紊乱可以导致髁突软骨出现明显的病理性改建。软骨内成骨是软骨重要的生理性改建活动之一,期间软骨细胞要经历增殖、成熟、肥大以及最终凋亡等阶段。PTHrP及其受体PTH1R以及Sox9正是参与软骨生长发育的重要的生长调控因子。PTHrP通过调节软骨细胞分化和成熟的正确比率来调控软骨内成骨的正常进程,如果软骨细胞只增殖不成熟、不肥大,骨的生长将止于软骨形成阶段,而如果软骨细胞加速成熟和肥大,会造成软骨发育不良,这两种骨发育畸形的情况都与PTHrP及其受体PTH1R的精密调控有着密切的联系。Sox9在软骨发育初期起到至关重要的作用,如果间充质细胞凝集前失活Sox9,软骨的发育就会出现障碍。本研究是对本课题组所建实验性咬合紊乱大鼠的下颌髁突软骨中Sox9、PTHrP及其受体PTH1R等物质进行检测,探讨这些大分子物质在大鼠髁突病理性改建活动中的表达变化及其重要意义。 40只8周龄雌性SD大鼠,随机、等量分为实验组和空白对照组,适应性饲养3天后,实验组采用正畸方法以左侧上颌、右侧下颌第一、二磨牙为支抗,推第三磨牙向远中移动,造成实验性咬合紊乱。空白对照不做任何处理,同环境下饲养直至实验结束。分别在实验开始第4、8周后取材,利用HE染色观察大鼠髁突软骨的形态学变化,利用免疫组化方法、RT-PCR分别检测Sox9、PTHrP、PTH1R等物质蛋白和mRNA水平的变化情况。实验结果: 1.对照组髁突软骨表面光滑连续,可分为纤维层、增殖层、肥大层和钙化软骨层,各层细胞排列整齐,界限清晰。实验组大鼠髁突软骨出现明显的凝固性坏死、软骨细胞数目明显减少、胞核固缩、局部嗜均质染色等退行性变(3/20个髁突出现典型变化),且实验组大鼠髁突软骨后部厚度较对照组明显增厚(P0.05)。 3.免疫组化染色结果:PTHrP主要表达于髁突软骨肥大层,胞浆呈棕色深染,其受体PTH1R主要表达于髁突软骨肥大层,细胞膜呈棕色深染。与对照组相比,实验组软骨退变区域的PTHrP阳性细胞数以及PTH1R阳性细胞数均显著减少;Sox9主要分布于髁突软骨肥大层,细胞核呈棕色深染,实验组软骨退变区域的阳性细胞数较对照组也显著减少。 4.RT-PCR结果:实验组8周组髁突软骨中的PTHrP、PTH1R、Sox9的mRNA水平均较对照组明显下降。由此得出以下结论: 1.推一侧上颌、对侧下颌第三磨牙向远中所致的渐进性咬合紊乱可导致雌性大鼠髁突软骨发生病理性改建。 2.作为软骨生长发育进程中的重要调节因子,PTHrP及其受体PTH1R以及Sox9均参与了渐进性咬合紊乱所致的大鼠髁突软骨的改建活动。
【图文】：

示意图,第三磨牙,橡皮圈,正畸

图 1-1 用正畸橡皮圈（）推第三磨牙向远中移动的示意图M1：第一磨牙 M2：第二磨牙 M3：第三磨牙1.3 标本处理分别于实验开始 4、8 周后，深度麻醉（1%戊巴比妥 1ml/只）下，打开胸腔，经主动脉插管分别灌注生理盐水（200ml/只）和多聚甲醛（40g/L,400ml/只），整体取出双侧 TMJ，于 40g/L 的多聚甲醛中后固定 12 小时，krinstense 液中脱钙一周，常规脱水、石蜡包埋、切片（厚约 6um）。苏木素-伊红（HE）染色，光镜观察。1.4 软骨厚度测量在 Leica DM2500 显微镜下，应用 Leica qwin 软件采集图像并测量。首先将髁突软骨与骨的交界线长度等分为前、中、后三部分，再将各部分进行 4 等分，以每部分内的三个等分点为测量点，，测量软骨全层厚度。以三

髁突软骨,后部,增厚,实验组

相比对照组，实验组后部增厚（P=0.020）,中部，前部无差异（P>0.05）。根据两样本的 t 检验，实验 8 周组髁突软骨后部厚度明显增厚（P<0.05），4 周组增厚不明显（P>0.05）。（图 1-2）
【学位授予单位】：第四军医大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2010
【分类号】：R783

【参考文献】