烟草浸提液对人牙龈成纤维细胞在钛板上附着的影响

发布时间：2020-03-28 09:11

【摘要】： 目的: 本研究观测烟草浸提液(smokeless tobacco extract,ST)和尼古丁(nicotine)对人牙龈成纤维细胞(Human Gingival Fibroblasts,HGFs)在钛板上附着数目、形态、增殖及分泌胶原的影响,从细胞水平探讨烟草对种植体龈界面破坏的理论机制。 方法: 实验1、采用组织块法进行HGFs的原代培养,倒置相差显微镜下观察细胞生长状态。取第3代HGFs用链霉菌抗生物素蛋白-过氧化物酶连结法(streptavidin-perosidase,SP)进行波形丝蛋白(cytokeratin,CK)和角蛋白(vimentin,V)染色以鉴定细胞来源,用血球计数板计数法记录细胞的生长曲线。 实验2、将厚度1mm、直径10mm的钛板用金相砂纸逐级打磨。反射光显微镜、扫描电镜观测钛板表面形态。表面粗糙度测量仪测量钛板表面粗糙度,以Ra值表征。 实验3、将消毒备用的钛板置于24孔板中,加入含0、0.01、0.1、1、5、10g/L ST和0.03、0.15、0.3g/L尼古丁(9种浓度)的细胞悬浮液。孵育2小时后,MTT法测定钛板表面粘附细胞数;孵育24小时后,计算机图像分析系统测定钛板表面细胞铺展形态的变化。 不含处理因素的细胞悬浮液接种于预先放置在24孔板内的钛板表面,孵育24小时后,更换含0、0.01、0.1、1、10g/L ST和0.03g/L尼古丁(6种浓度)的培养液常规培养,在第1、4、7、10天行MTT法测定细胞增殖率。 实验4、取细胞悬浮液接种于24孔板内钛板表面,孵育24小时后,更换含0、0.01、0.1、1、5、10、25g/L ST和0.03、0.15、0.3g/L尼古丁(10种浓度)的培养液。继续孵育48小时后,吸取出24孔板内的培养液,检测细胞培养上清液中羟脯氨酸含量。 结果: 1、HGFs最早在第3d从组织块中爬出,大多呈梭形。一般2～3周长满瓶底,可进行传代。SP免疫组化染色结果显示HGFs波形丝蛋白染色为阳性,角蛋白染色为阴性,提示该细胞来源于中胚层,非上皮来源性细胞。HGFs生长曲线略呈“S”形,接种后第1天细胞数略有下降,随后生长逐渐加快,这种状态持续至第5d。第6d开始进入平台期,细胞生长速度减缓。 2、打磨后的钛板表面呈规则沟嵴相间的表面形貌,其表面粗糙度测量Ra值为0.1022±0.00766μm。 3、MTT法测2小时钛板表面粘附细胞数表明,ST和尼古丁均可抑制牙龈成纤维细胞在钛板表面的附着,且抑制作用随着ST或尼古丁浓度的增加而增强。控制组(0g/L ST)与0.01、0.1、1g/L ST 0.03g/L尼古丁组比较,统计分析差异无显著性(P＞0.05)。而控制组与5、10、25g/L ST和0.15、0.3g/L尼古丁组比较时,统计分析差异有显著性(P＜0.05)。 HGFs在钛板表面粘附24小时后,表现为扁平的纺锤形,沿着划痕方向伸展。ST和尼古丁均可抑制HGFs在钛板表面的伸展,且随着ST或尼古丁浓度的增加,细胞伸展面积逐渐减小,形态逐渐变为圆形。 MTT法测1d、4d、7d、10d细胞在钛板表面的增殖结果表明,ST或尼古丁可抑制HGFs在钛板表面的增殖,且抑制的强弱与剂量相关。当ST的浓度为10 g/L时,细胞的增殖完全被抑制。 4、ST和尼古丁可抑制HGFs胶原的合成,且抑制的强弱与ST和尼古丁的剂量相关。 结论: 1、牙龈成纤维细胞体外培养成功率较高,可为本实验的研究提供足够的细胞。 2、处理后的钛板表面呈现规则的形貌,粗糙度在临床常用种植体基桩表面粗糙度的范围内,适于细胞附着。 3、ST和尼古丁均可抑制HGFs在钛板表面的粘附、形态伸展及其增殖,且抑制强弱与剂量呈正相关。 4、ST和尼古丁均可抑制钛板上HGFs胶原合成,且抑制强弱与剂量呈正相关。
【图文】：

单因素方差分析结果显示:各处理组间吸光度均数差异有显著性PsT<0.01;F尼古丁=23.504，P尼古丁<0.01)。阴性组与ST组之间两两比0.01、0.1、19/LST组吸光度均数比较无统计学差异(P>0.05);59/LST组之间比较无统计学差异(P>0.05);而阴性组与59/LS组与59/LST组，109/LST组与19/LST组，109/LST组与0.19/LST组与0.019/LST组吸光度均数各不相同，分别有统计学意义(P阴性组与尼古丁组之间两两比较:阴性组、0.039/L尼古丁组较无统计学差异(P>0.05);阴性组与0.159/L尼古丁组，阴性组古丁组分别有统计学意义(P<0.05)。3、ST对人牙跟成纤维细胞在钦板表面贴附形态的影响在荧光显微镜下，，放大倍数为100一200倍时，钦板表面不显像，

滨州医学院硕士论文量逐渐减少(附图17~19)。在5克/升ST时可见坏死裂解的细胞(附图20)。从表2、图2可见，牙跟成纤维细胞在钦板表面的铺展受到烟草浸提液和尼古丁的抑制。单因素方差分析结果显示:各处理组间铺展面积均数差异有显著性(FsT=42.962，Ps丁<0.01;F尼古T=85.779，P尼古T<0.01)。阴性组与ST组之间两两比较:阴性组与各ST组铺展面积均数比较均有统计学差异(P<0.05):0.01与0.19/L组，5与109/L组分别比较无统计学差异(P>0.05);19/L组与0.01、0.1、5、109/L组比较均有统计学差异(P<0.05)。阴性组与尼古丁组之间两两比较:阴性组与0.03、0.15、0.39/L组比较均有统计学差异(P<0.05);尼古丁0.039/L组与0.15、0.39/L组比较均有统计学差异(P<0.05);0.巧与0.39/L组之间无明显差异(P>0.05)。表2不同浓度ST和尼古丁对HGFs在钦板表面24小时铺展的影响分组面积x士s单位:对形状系数Sf阴性 09/LST 0.019/LST34421.31士8331.49 1.0677士0.2678 21902.63士5757.61 0.9107士0.2153 0.19/LST19/LST59/LST 109/LST19855.13士8081.42 0.7915士0.179113914.06士2568.10 0.7676士0.20769337.85士1785.36 0.3797士0.15296949.03士2129.79 0.7173士 0.31730.039/L尼古丁0.159/L尼古丁0.39/L尼古丁26296.42士4238.05 0.7903士0.166410209.56士3837.82 0.9398士0.17636470.83士1986，55 0.8104士O，2126400003500030000250002000015000100005000
【学位授予单位】：滨州医学院
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2008
【分类号】：R78

【参考文献】

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1 孙晓强;刘晓勇;王瑛_";王凤光;汪育苗;;吸烟对牙周炎患者牙龈组织中成纤维细胞及胶原纤维的影响[J];北京口腔医学;2006年01期

2 徐燕,袁萍,李颂,胡勇,王明丽;尼古丁和烟草浸提液对人牙龈成纤维细胞生长和贴附能力的影响[J];口腔医学研究;2004年01期

3 武云霞,焦艳军,孙晓军;牙种植修复与骨密度的临床应用研究[J];中国口腔种植学杂志;2004年03期

4 文学军,王小祥;金属生物材料的微粗糙表面及其生物学效应(Ⅰ)─—金属生物材料的微粗糙表面[J];生物医学工程学杂志;1997年01期

5 季卫平,吴泉州,金丽霞;103例男性老年人骨质疏松发生率与诊治的研究[J];中国中医骨伤科杂志;2000年06期

6 王兴;现代口腔种植学的发展趋势[J];中华口腔医学杂志;2003年04期

7 徐燕,蒋勇,李颂,梅陵宣,张黎,赵春晖;烟草对牙周成纤维细胞影响的实验观察[J];中华口腔医学杂志;2003年05期

8 岳伟,邹丽剑;纯钛种植体界面骨愈合及其生物力学研究[J];中华整形外科杂志;2003年05期

9 洪咏龙 ,魏建华 ,隋文 ,刘宝林;牙骨质基质提取物促进牙龈成纤维细胞在光滑钛表面上粘附及移行的实验研究[J];中国现代医学杂志;2002年14期

本文编号：2604247