rhIGF-I明胶微球的制备及对人牙周膜成纤维细胞作用的实验性研究

发布时间：2020-04-01 10:09

【摘要】： 目的：制备人重组胰岛素样生长因子-Ⅰ明胶微球(recombinant human insulin-like growth factor-Ⅰgelatin microspheres, rhIGF-Ⅰ-GMs),观察其一般性质、体外释药特性及其对人牙周膜成纤维细胞(human periodontal ligament fibroblasts, HPDLFs)的增殖及合成Ⅰ型胶原的影响。从而初步探讨rhIGF-Ⅰ-GMs对rhIGF-Ⅰ的缓释作用,及其对HPDLFs作用的时间和浓度效果,为其在牙周组织工程中的应用提供理论依据。 方法：用改良乳化冷凝聚合法制备rhIGF-Ⅰ-GMs,扫描电镜(scanning microscope,SME)观察其一般性质；rhIGF-Ⅰ-ELISA试剂盒测定rhIGF-Ⅰ的含量,计算微球包封率和载药率及绘制微球体外释药曲线。取第4代生长状态良好的HPDLFs用于实验。将制备好的rhIGF-Ⅰ-GMs作用于HPDLFs,实验分为三组:rhIGF-Ⅰ-GMs组(加入rhIGF-Ⅰ-GMs,依据微球含rhIGF-Ⅰ相对于培养液(Dubecco's modified eagle medium, DMEM)的终浓度再分为1,5,10,50和10μg/L5个浓度组)、rhIGF-Ⅰ组(加入rhIGF-Ⅰ,依据rhIGF-Ⅰ相对于DMEM的终浓度再分为1,5,10,50和10μg/L5个浓度组)和对照组(不加rhIGF-Ⅰ),用四唑盐比色法(methyl thiazolyl tetrazolium, MTT)和羟脯氨酸试剂盒(消化法)动态观察其对HPDLFs增殖及合成Ⅰ型胶原的影响。 结果：(1)所制备的微球表面光滑圆整,球体均匀度好,平均粒径为(12.51±3.53)μm,冻干粉剂为黄白色粉末状,再分散性良好,微球载药量和包封率分别为920ng/g和92.0%,体外7d内药物缓释72.5%,35d可降解；(2)HPDLFs呈星形或长梭形,核呈圆形或卵圆形,有2-4个胞浆突起,核仁清晰可见,呈漩涡状、栅栏状、放射状外观生长,为典型的成纤维样细胞形态,细胞活性好；(3)rhIGF-Ⅰ和rhIGF-Ⅰ-GMs均明显促进HPDLFs增殖及合成Ⅰ型胶原的效果(P0.05),rhIGF-Ⅰ-GMs较单独应用rhIGF-Ⅰ的效果更加显著(P0.05),呈浓度及时间依赖性。 结论：rhIGF-Ⅰ-GMs冻干粉剂制备良好；rhIGF-Ⅰ-GMs在7d内对rhIGF-Ⅰ有良好的缓释作用；HPDLFs形态和活性良好可以用于实验研究；rhIGF-Ⅰ-GMs与HPDLFs有良好的生物相容性,且促进HPDLFs增殖及合成Ⅰ型胶原的效果明显优于单独使用rhIGF-Ⅰ。
【学位授予单位】：山西医科大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2010
【分类号】：R780.2

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本文编号：2610315