Toll样受体2在人牙髓组织中表达和意义的研究

发布时间：2020-04-11 12:25

【摘要】：目的:本研究收集人正常及炎症牙髓组织,检测TOLL样受体2(toll-like receptor 2,TLR2)在正常牙髓组织中的表达情况,比较正常与炎症牙髓组织的基本形态和TOLL样受体2(TLR2)的表达及分布。随后体外培养人牙髓细胞(Human dental pulp cells,h DPCs)和变形链球菌,用变形链球菌提取物刺激h DPCs,模拟炎症条件下的牙髓组织,检测变形链球菌提取物对h DPCs中TLR2表达的影响。探讨TLR2在牙髓组织中的定位与表达及与牙髓天然免疫的关系。方法:1.取临床拔除的牙体组织完整,无症状的第三磨牙获取牙髓组织,采用RT-PCR和Western-blot的方法检测TLR2基因及蛋白在正常人牙髓组织中的表达。2.分别收集正常和炎症人牙髓组织标本,通过HE染色法观察牙髓组织形态,免疫组织化学技术对组织中TLR2的表达进行定位。3.超声破碎法提取变形链球菌提取物,并作用于体外培养的h DPCs,免疫组化检测变形链球菌提取物作用于h DPCs后TLR2的表达和分布情况,荧光定量PCR(q PCR)检测TLR2 m RNA的表达水平。结果:1.正常牙髓组织表达TLR2。RT-PCR结果显示,琼脂糖凝胶电泳所有样本均显示条带,与预期扩增产物大小相一致,正常牙髓组织中均可表达TLR2 m RNA;Western blot结果显示,所有牙髓组织标本TLR2均表达阳性。2.HE染色结果显示,在炎症牙髓组织中,大量炎性细胞浸润及血管充血扩张,而正常健康的牙髓是疏松的结缔组织。免疫组化结果显示正常牙髓组织和炎症牙髓组织TLR2均表达阳性。TLR2表达于细胞质及血管周围组织,但炎症牙髓组织较正常牙髓组织阳明显增强。阴性对照组未见阳性表达。3.牙髓细胞传至第3代,形态均一,呈长梭形纤维细胞。免疫组化检测结果显示波形丝蛋白和DSPP呈染色阳性着色,角蛋白呈染色阴性着色,提示细胞来源于间充质,并且具有成牙本质细胞的特性。变形链球菌镜下观察成球状单体连成长链状。免疫组化结果显示,10 ug/m L和100ug/m L变形链球菌提取物10 ug/m L和100ug/m L作用牙髓细胞0 h、24h、48h后牙髓细胞均有TLR2表达,且h PDCs TLR2阳性细胞的表达率随着变形链球菌提取物刺激的时间增加而增大,均明显高于空白对照组(P0.05)。PCR结果显示10 ug/m L和100ug/m L两种浓度变形链球菌提取物作用于h DPCs24 h、48h后,TLR2 m RNA的表达量明显增加,高于空白对照组(P0.05),并且随刺激时间的延长表达量逐渐增加(P0.05)。结论:牙髓组织中表达TLR2,且在炎症牙髓情况下,TLR2表达上调;并随着刺激时间的增加,TLR2表达增加。我们推测牙髓组织通过表达TLR2进行天然免疫防御并且TLR2参与牙髓损伤修复。
【图文】：

局部放大图,局部放大,髓组织,牙髓组织

Toll 样受体 2 在人牙髓组织中表达和意义的研究硕士学位论文A: 炎症牙髓组织在低倍镜下组织学表现（×100）B: 炎症牙髓组织在低倍镜下组织学表现（×200）C: 图 B 中局部放大组织学表现（×400）D: 正常牙髓组织在低倍镜下组织学表现（×100）E: 正常牙髓组织在低倍镜下组织学表现（×200）F: 图 E 中局部放大组织学表现（×400）3.2 免疫组织化学染色观察TLR2 抗体染色结果：用抗 TLR2 抗体进行实验组免疫组织化学染色，镜下观察结果，，炎症牙髓组织中，细胞胞浆及胞膜呈棕色阳性表达。正常牙髓组织中，呈浅黄色弱表达。阴性对照组未见阳性着色（图 2-2）

波形,后组,牙髓组织,细胞角蛋白

无阳性反应细胞为 0 分，浅黄色为 1 分，棕黄色为 2 分，棕褐色分[76]。根据上述两项指标想乘积分数=（1）×（2）。积为 0 判断为（为 1～2 判断为（+），积为 3～4 判断（++），积为 6～9 判断为（+++3.实验结果3.1 牙髓细胞培养与鉴定牙髓组织接种至培养瓶后，约一周可见牙髓组织块周围长有长梭胞爬出，呈放射状（图 3-1A），约 2 周后细胞融合接近 70%（图 3-1传至第三代细胞形态均一，呈长梭形，平行排列或呈旋涡状生长（图 3细胞免疫组化结果显示该细胞角蛋白染色结果呈阴性着色（图 3-1 D）染色结果呈阳性着色（图 3-1 E）；波形丝染色结果呈强阳性着色（图
【学位授予单位】：广西医科大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2018
【分类号】：R781.1

【参考文献】