脂联素在牙周炎致病机制中作用的初步研究

发布时间：2020-04-12 04:21

【摘要】：研究目的:本课题首先在体外培养人牙龈成纤维细胞(human gingival fibroblasts,HGFs)的基础上,用real-time PCR法检测脂联素(Adiponectin,APN)对牙龈卟啉单胞菌(Porphyromonas gingivalis,P.g)脂多糖(lipopolysaccharide,LPS)刺激下HGFs分泌白介素-6(Interleukin-6,IL-6)、白介素-10(Interleukin-10,IL-10)、重组人血红素加氧酶-1(HMOX-1)、环氧酶-2(COX-2)的影响,初步揭示脂联素及牙龈成纤维细胞在牙周局部炎症发生发展过程中所起的作用,为进一步探讨牙周炎的致病机理和辅助药物治疗提供理论依据。研究方法:选取自2017年08月至2017年10月因拔除埋伏第三磨牙阻生齿在天津医科大学口腔医院颌面外科就诊的患者(年龄20-26岁,平均年龄24岁),排除患有全身系统性疾病如糖尿病、妊娠,吸烟,获得患者知情同意后,在术中收集色形质健康、无明显炎症的牙龈组织。(1)运用组织块原代培养法从体外培养健康的人牙龈成纤维细胞,显微镜下观察其生长状况,经传代后获得大量的细胞,取第3代细胞进行免疫组化染色进行来源鉴定,选取4-6代细胞进行实验。(2)分别用APN、P.g LPS、APN+P.g LPS刺激HGFs达24h。细胞刺激的情况如下:1μg/ml APN,2μg/ml P.g LPS,2μg/ml P.g LPS+1μg/ml APN,空白对照(10%FBS培养基)。(3)上述方法刺激细胞后,运用real-time PCR法检测不同时间点(6、8、24h)HGFs中IL-6、IL-10、HMOX-1、COX-2的mRNA表达水平。(4)采用IBM SPSS Statistics 23.0统计软件进行数据分析,做描述性分析;计数资料表示:均数±标准差;单因素分析采用One-way ANOVA来分析,析因设计采用析因分析,当p0.05时认为有统计学差异。结果:(1)运用组织块贴壁法从组织块中成功培养出HGFs。在显微镜下仔细观察显示:原代培养约6-8天后有细胞从组织块中爬出,传代后细胞形态为趋于一致的长梭形。免疫组化结果显示:细胞抗角蛋白染色呈现阴性,抗波形丝蛋白染色呈现阳性,证实我们培养的细胞为来源于中胚层的人牙龈成纤维细胞,且不混杂上皮源细胞。(2)与空白对照组相比,P.g LPS明显促进HGFs分泌炎性介质IL-6与COX-2,且有统计学差异(p0.05),明显抑制HGFs分泌抗炎介质IL-10与HMOX-1,且有统计学差异(p0.05),P.g LPS可以明显刺激HGFs的炎症反应。(3)与空白对照组相比,APN明显抑制HGFs分泌炎性介质IL-6与COX-2,且有统计学差异(p0.05),促进HGFs分泌抗炎介质IL-10与HMOX-1,且有统计学差异(p0.05);(4)在各炎性介质最佳刺激点,APN明显抑制P.g LPS对HGFs分泌IL-6和COX-2的促进作用,且有统计学差异(p0.05);APN明显抑制P.g LPS对HGFs分泌抗炎因子IL-10的效应,且有统计学差异(p0.05);APN对P.g LPS刺激后HGFs分泌抗炎因子HMOX-1具有一定影响,但无统计学差异(p0.05)。结论:(1)牙龈成纤维细胞受到P.g LPS刺激后能合成分泌多种细胞炎症因子发挥免疫炎症反应,同时P.g LPS可以作为牙周炎体外模型的高效诱导剂。(2)APN可抑制HGFs分泌炎性介质IL-6与COX-2,促进分泌抗炎介质IL-10与HMOX-1,发挥抗炎作用。APN可抑制P.g LPS刺激HGFs分泌IL-6及COX-2,也抑制P.g LPS对HGFs分泌抗炎因子IL-10的效应,产生抗炎作用。(3)APN可通过调控促炎因子和抗炎因子在牙周炎的发生发展中发挥一定抗炎作用。
【图文】：

HGFs组织来源的鉴定（免疫组织化学SP法)

不同时间点2μg/mlP.gLPS刺激HGFs分泌炎性介质（图3A:IL-6,图3B:COX-2,图3C:IL-10,图3D:HMOX-1）
【学位授予单位】：天津医科大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2018
【分类号】：R781.42

【参考文献】

相关期刊论文 前2条

1 陈立锐;徐超;;控制牙周炎对糖尿病合并牙周炎患者疗效的影响[J];慢性病学杂志;2015年02期

2 王琨;许彦枝;朱f趂，

本文编号：2624269