牙髓干细胞分离培养鉴定和体外诱导分化的研究

发布时间：2020-04-13 13:47

【摘要】： 牙髓干细胞的研究是目前牙髓生物学领域一个崭新的课题，它对认识牙髓损伤修复机理、探索新的保存牙髓治疗技术具有重要的意义。本研究着眼于小鼠牙髓干细胞分离、培养、鉴定的实验研究，为研究牙髓干细胞体外定向诱导分化创建可靠的实验模型。并初步探讨Notch信号在牙髓干细胞中的生物学功能。我们成功地从小鼠牙髓组织中培养获得牙髓干细胞，进一步分析结果显示：1)牙髓干细胞有增殖快的特点，细胞呈集落状生长，集落形成率为1.6-2.5／10~4个细胞。2)H．E．染色，，见细胞有体小、核大的特点，有较多的双核细胞，细胞间的界限不清。3)碱性磷酸酶染色阳性。4)细胞表型组化鉴定Collagen-Ⅰ、Collagen-Ⅲ、Osteonectin、Osteopontin、FGF-2、BSP染色阳性，而DSPP染色阴性。5)端粒酶第口旱巨大卿馋士学正枯文活性分析结果，牙髓干细胞与肿瘤细胞有着本质上的区别，为非永生性细胞，且端粒酶活性随着体外培养时间延长而降低。6）电镜观察牙髓干细胞间存在细胞连接，在一定程度上说明细胞间有着较复杂的信号通讯方式，并影响着牙髓干细胞的增殖与分化。本课题对获得的小鼠牙髓干细胞进行了体外诱导分化实验。用 BMP》TGF－e、FGF等细胞因子对牙髓干细胞体外诱导8天DSPP In－RNA的表达，用 RT－PCR分析，结果表明有 DSPP InRNA的表达，提示成牙本质细胞的分化成熟是牙髓干细胞和前体细胞增生并沿着一定方向分阶段分化的结果。DSPP是终末分化的成牙本质细胞的特征蛋白，说明牙髓干细胞可在BMPZ、TGF－p、FGF细胞因子诱导作用下，有向成牙本质样细胞分化的趋势。同时观察到细胞间信号NOtCh 在牙髓干细胞中有表达，为研究N。tCh信号对牙髓干细胞的增殖的影响奠定基础。为了进一步研究NOtCh信号途径在牙髓干细胞分化过程中的作用，我们拟利用N。tch途径关键转录因子RBP－J条件性基因剔除小鼠，分析NmCh信号途径阻断后牙髓干细胞分化的变化。因此，我们构建了表达Cre基因的逆转录病毒载体，获得表达有Cre的病毒上清，并尝试着感染N。t。h－RBP－J条件敲除小鼠的牙髓干细胞，结果显示牙髓干细胞的N。tCh信号途径阻断后，细胞的增殖受到一定程度的抑制，提示N扯Ch信号途径可能参与了牙髓干细胞的分化。
【学位授予单位】：第四军医大学
【学位级别】：博士
【学位授予年份】：2002
【分类号】：R781.3

【引证文献】