变形链球菌耐氟菌株中耐酸相关基因dfp和dnaK突变的检测

发布时间：2020-04-13 21:40

【摘要】：龋病是人类最常见的细菌感染性疾病之一。变形链球菌是人类龋病的始发因素,通过对牙面的粘附、产酸及耐酸表现其致龋性,是目前公认的最重要的致龋菌。氟化物是目前最有效的防龋致剂,因此得到在全世界范围内的广泛应用。然而为了提高并维持菌斑内较高的氟化物水平,更好的预防和治疗龋病,局部应用氟化物的浓度和次数逐渐增加,将有可能导致耐氟菌株的选择性生长。耐氟菌株与亲代菌株相比具有更强的耐氟性、产酸和耐酸能力,致龋能力也随之增强。变形链球菌耐氟菌株耐酸能力的提高,是其致龋性提高的一个重要因素,对于耐酸相关基因的研究,一直是国内外学者研究的热门。目前本课题组在前期的研究中已检测出变形链球菌耐氟菌株中耐酸相关基因ffh、dgk、dltc等发生突变,突变的具体位置也已经清楚,结果已登陆美国GenBank。本实验以变形链球菌耐氟菌株耐酸相关基因dfp和dnaK为目的基因。采用体外人工诱导法诱导变形链球菌耐氟菌株,根据GenBank发表的变形链球菌耐酸相关基因dfp和dnaK的序列,根据引物设计原则,在保守区分别设计引物进行PCR,获得目的基因片段,用pMD18-T载体进行T/A连接,转入大肠杆菌感受态细胞构建重组质粒,交由生化公司进行测序鉴定。结果发现变形链球菌耐氟菌株耐酸相关基因dfp没有发生突变,而dnaK与GenBank报告序列不同,有3个碱基发生突变。突变发生的位点分别在513(T→A),1029(T→A),1172(T→C)。
【图文】：

第2章实验2.3.1变形链球菌耐氟菌株的诱导UA159见图1，UA159FR的镜下形态见图2:图l:uA159FR在BHI培养基上的形态图2:uA159段在镜下的形态(1oo倍油镜)2.3.2变形链球菌耐氟菌株基因组的提取UA159基因组的提取见图3:20侧肠口1创口嘴.7加阮l5加肠图3:以159FR基因组的提取。 1:D200oDNAMal火er;2、3:u^z59FR基因组 2.3.3dfP和 dnaKpCR产物:1.d印:根据GenBank发表的变形链球菌d印基因序列，设计引物。d印基因全长540bP。上游引物:夕一ATACCAACGCCTACATGGCA一3’下游引物:5’一GGACCATAGACAATAGAGGC一3’

态(1oo倍油镜)2.3.2变形链球菌耐氟菌株基因组的提取UA159基因组的提取见图3:20侧肠口1创口嘴.7加阮l5加肠图3:以159FR基因组的提取。 1:D200oDNAMal火er;2、3:u^z59FR基因组 2.3.3dfP和 dnaKpCR产物:1.d印:根据GenBank发表的变形链球菌d印基因序列，，设计引物。d印基因全长540bP。上游引物:夕一ATACCAACGCCTACATGGCA一3’下游引物:5’一GGACCATAGACAATAGAGGC一3’
【学位授予单位】：吉林大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2011
【分类号】：R781.1

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