厚朴酚对变形链球菌生物膜致龋毒力因子作用的研究

发布时间：2020-04-18 02:14

【摘要】：目的：本实验通过激光共聚焦显微镜(CLSM)观察厚朴酚对体外变形链球菌生物膜的作用效果，并初步了解厚朴酚对变形链球菌生物膜的产酸、耐酸、胞外多糖形成及生物膜形成能力等相关致龋毒力因子的转录表达的影响，为进一步研究厚朴酚防龋的药理作用机制奠定基础。方法:首先在盖玻片上建立变形链球菌生物膜体外模型，经不同药物浓度作用后,分别加入吖啶橙/溴化乙锭（AO/EB）染色，在激光共聚焦显微镜观察并进行红绿荧光定量分析；根据GenBank基因库查询ffh、gtfD、pdp等基因序列并设计引物,RT-PCR方法测定变形链球菌生物膜致龋毒力因子ffh、gtfD和pdp基因片段受不同药物浓度作用后基因表达水平的变化。结果：CLSM观察厚朴酚作用于已形成的24h细菌生物膜后，，实验组绿色荧光面积随着药物浓度的增加而减少，与对照组相比各药物浓度均明显降低了细菌生物膜的生长活性,膜内活菌比例明显下降；通过电泳凝胶成像系统检测分析,在梯度药物浓度作用并保证细菌模板量一致的情况下，毒力因子ffh、gtfD、pdp等的基因片段在电泳检测条带上的亮度依次变暗甚至消失，说明厚朴酚在一定浓度下能够使变形链球菌生物膜毒力因子的基因表达量呈明显下降趋势。结论：厚朴酚对变形链球菌生物膜的生长活性有良好的抑制作用，并且能抑制其致龋毒力因子ffh、gtfD、pdp等基因片段的mRNA的转录表达,由此可以推断厚朴酚对变形链球菌生物膜生长的影响是由于其抑制或干扰了某些基因片段的转录和表达，从而导致生物膜结构受到破坏。
【图文】：

分子结构图,厚朴酚,粗粉

图 1 厚朴酚的分子结构图酚对人体有很高的安全性,并已通过 FDA(美国酚主要被应用在临床医药行业;也被研究应用肤品中;应用到多种抗菌治疗药物中[33]-[34]。提取方法法粗粉，加入 5 ～10 倍量的水,除去挥发油，加, 置室温 24 h 后离心过滤，乙醚反复萃取其滤溶液洗涤、干燥过滤，挥去醚层可见结晶，约 4% 。有报道称厚朴酚在碱性环境中溶出沉法粗粉，加入 20 %的生石灰粉，搅拌均匀后加入

生物膜,链状结构,药物作用,细菌

生物膜内的细菌也由大的团片变成散在的链状结构。说明在高浓度药物作用下,生物膜内的死菌增多,并且生物膜结构受到破坏.图示如下（2～8）:图2 阴性对照组 CLSM×200
【学位授予单位】：佳木斯大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2013
【分类号】：R781.1

【参考文献】