IL-6、IL-10对EGF体外诱导人牙龈成纤维细胞上皮化的影响

发布时间：2020-04-25 03:57

【摘要】：目的：外伤、皮肤黏膜病、放射性因素以及各种生化因素等导致的上皮损伤,往往伴随着组织的严重缺损,依靠自身的恢复能力难以恢复到正常的组织结构和功能状态,快速的创面再上皮化是减少创面感染和提高患者救治成功率的关键。目前组织工程为上皮缺损修复开辟了新途径,已有研究证明大鼠骨髓MSC经诱导后可以表达上皮特异性蛋白-角蛋白。但MSC的获取较难。目前研究发现：牙龈成纤维细胞自我更新能力活跃,在牙周、牙龈组织的保护和修复中起重要作用。最近发现的牙龈间充质干细胞具有易取材,增殖快,有成骨、成脂肪、成软骨细胞等多向分化的能力,表明牙龈成纤维细胞中可能储存有部分干细胞特性的细胞,因此牙龈成纤维细胞有望成为组织损伤修复的相对理想的种子细胞。为探讨牙龈成纤维细胞作为组织工程的种子细胞应用于上皮损伤修复的可能性,本次实验采用表皮细胞生长因子(EGF)诱导法诱导牙龈成纤维细胞向上皮细胞转化,同时在条件培养基中加入一定浓度的IL-6、IL-10初步模拟炎性环境,探讨炎症因子对牙龈成纤维细胞上皮化的影响,检测牙龈成纤维细胞向上皮细胞转化的潜力,以及不同炎症环境对其转化效率的影响,以期为将牙龈成纤维细胞引入创伤修复的治疗提供一定的实验支持。方法： 1.组织块法体外培养人牙龈成纤维细胞,传代培养至第4-7代,细胞免疫化学法检测其角蛋白及波形蛋白表达。 2.传代培养牙龈成纤维细胞至4-7代,调整细胞密度0.5×106/L,配制条件培养基(含10μg/L EGF、2%胎牛血清、1%双抗的EpicM培养基),设置分别加入10μg/L IL-6、10μg/LIL-10的条件培养基,用于诱导培养；对照组为完全培养基(含10%FBS、1%双抗的α-DMEM培养基),诱导期为4天。细胞免疫化学法及免疫荧光染色法检测角蛋白以及波形蛋白的表达,流式细胞仪法定量检测角蛋白表达率。结果： 1.约4天左右,细胞开始从组织块周围爬出,一个半月左右细胞可传至第3代,镜下观察细胞状态良好,形态稳定,均一,杂质细胞少,细胞纯度较高,满足进一步实验的条件。细胞免疫化学法检测见角蛋白表达阴性波形蛋白阳性表达。 2.诱导培养4天后,细胞免疫化学染色EGF组、EGF+IL-6组、EGF+IL-10组均可见上皮细胞标志蛋白角蛋白的阳性表达,波形蛋白表达阳性；免疫荧光染色显示,各实验组细胞角蛋白荧光表达阳性的同时,波形蛋白荧光表达也呈阳性,但相同曝光度下角蛋白荧光表达强度较波形蛋白强度弱,对照组角蛋白表达阴性,波形蛋白表达阳性。流式细胞术检测各组细胞角蛋白表达率分别为条件培养基(EGF)组72.5%、条件培养基+IL-6诱导组(EGF+IL-6)91.9%、条件培养基+IL-10诱导组(EGF+IL-10)86.3%、对照组68.9%。结论：实验表明人牙龈成纤维细胞体外培养具有易取材、增殖快、形态稳定的特点。牙龈成纤维细胞在一定浓度EGF存在下可以被诱导表达角蛋白,具有向上皮细胞转化的潜能。炎性细胞因子IL-6、IL-10可明显提高EGF诱导牙龈成纤维细胞表达角蛋白的效率,为将牙龈成纤维细胞引入上皮损伤的修复提供一定的实验依据。
【学位授予单位】：山东大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2013
【分类号】：R781.5

【参考文献】