人牙龈成纤维细胞诱导分化为骨骼肌样细胞的探讨

发布时间：2020-04-28 05:18

【摘要】：目的：口腔牙龈是牙周支持组织之一，主要由成纤维细胞组成。国内外许多研究证明，人体内的成纤维细胞具有干细胞特征~[1-4]。正常情况下，牙龈组织具有极强的修复功能，其修复活动是通过牙龈中成纤维细胞不同细胞亚群的定向迁移和分化实现的~[5,6]。口腔的基本生理功能如咀嚼、发音和面部表情运动都需要骨骼肌的收缩功能来完成。由于肌细胞再生能力很弱，肌肉损伤后，通常由成纤维细胞形成的肉芽组织充填，瘢痕修复。因此，如果能使成纤维细胞向骨骼肌细胞方向分化，可以减少瘢痕的形成，为骨骼肌细胞的再生提供了新的细胞来源。本研究拟采用体外培养牙龈成纤维细胞，使其诱导分化为骨骼肌样细胞，探讨牙龈成纤维细胞向骨骼肌细胞分化的潜能和可能性。方法： 1.人牙龈成纤维细胞的培养和鉴定。收集河北医科大学口腔医院口腔颌面外科下颌阻生齿拔出后切除的牙龈组织。采用组织块培养法，培养液选用含20%胎牛血清的低糖DMEM，0.25%胰酶传代，采用波形蛋白（vimentin）和骨骼肌肌动蛋白（α-sarcometric actin）肌球蛋白（myosin）的免疫细胞化学、Masson特殊染色进行鉴定。 2.人牙龈成纤维细胞的诱导培养。采用含10%胎牛血清DMEM/F12混合培养液，应用5-氮杂胞苷（azacytidine,5-aza）联合成肌分化因子（myogenic differentiation factor,Myod）、胰岛素样生长因子-1（insulin-like growth factors-1, IGF-1）对第3代人牙龈成纤维细胞诱导培养38天，采用vimentin和α-sarcometricactinmyosin的免疫细胞化学、Masson特殊染色进行鉴定。扫描电镜观察骨骼肌样细胞的形态学特征。结果： 1.人牙龈成纤维细胞原代培养及鉴定。牙龈组织原代培养7~10天，细胞爬出，成纤维细胞呈梭形、胞体大，核大，，圆形或椭圆形，有1~3个核仁。第3代细胞波形蛋白阳性。 2.人牙龈成纤维细胞诱导及鉴定。经诱导培养38天的细胞，在倒置显微镜及扫描电镜下，形态变为长圆柱状或棒状，胞浆两端突起消失，细胞核呈椭圆形，位于细胞中央。免疫细胞化学染色显示，骨骼肌样细胞对α-sarcometric actinmyosin呈阳性表达，Masson染色胞浆着红色。呈现骨骼肌样细胞的形态和免疫特征。结论：人牙龈成纤维细胞能够诱导分化为骨骼肌样细胞。
【学位授予单位】：河北医科大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2013
【分类号】：R780.2

【参考文献】