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咬合创伤对大鼠颞下颌关节软骨中PPAR-γ、IL-1β、IL-6、MMP-13表达的影响

发布时间:2020-05-01 16:23
【摘要】:研究背景:临床中常见因为牙齿异常接触,咀嚼肌肉紊乱和医源性因素导致的咬合创伤。咬合关系紊乱可能是颞下颌关节紊乱病(temporomandibuardisorder,TMD)的病因之一。近年来研究发现过氧化物酶增殖物激活受体γ(peroxisomepro1iferators-activatedreceptor-y,PPAR-y)在颞下颌关节疾病发展、炎症及异常改建中等紧密相关。实验目的:本研究通过建立咬合创伤动物模型,检测并分析不同时间点颞下颌关节中PPAR-y,基质金属蛋白酶-13(MMP-13,matrix metalloproteinase-13),白介素-1β(IL-1β,interleukin-1β),白介素-6(IL-6,interleukin-6)表达变化趋势,探索咬合创伤对颞下颌关节炎可能存在的病因机制,以及PPAR-γ在大鼠髁突炎症以及异常改建过程中的相关作用,并且研究炎症在颞下颌关节中的分布情况,为进一步探究颞下颌关节紊乱的病因机制提供新的思路,为颞下颌关节的治疗提供新的方向。实验方法:将48只8周龄雄性Wistar大鼠(体重180-220g)随机分为实验组一(Experimentgroup Ⅰ,EG Ⅰ)、实验组二(Experimentgroup Ⅱ,EG Ⅱ)和对照组(Control group,CG)三大组。在EG Ⅰ和EGⅡ大鼠右下颌第一磨牙上,粘接厚度为1.0mm的3/4钴铬金属冠。EG Ⅰ组为咬合创伤实验组,分为咬合创伤1周(week,w)、4w及8w组,每组各5只大鼠;EGⅡ组分别在1、4、8w去除咬合创伤并继续喂养2w后处死,根据时间点分为1+2w、4+2w及8+2w组,每组各5只大鼠;对照组大鼠在lw、3w、4w、6w、8w、]0w相应时间点处死,每组各3只大鼠。所有大鼠按实验计划在相应的时间点处死大鼠,取颞下颌关节样本,进行苏木精—伊红染色(hematoxylin-eosin staining,HE染色)观察颌下颌关节髁突软骨形态变化;免疫组织化学染色(immunohistochemical staining,IHC染色)检测PPAR-γ,IL-1β、IL-6和MMP-13的变化趋势。实验结果:第一部分 咬合创伤大鼠动物模型的建立本实验及本课题组前期实验己经验证3/4钴铬金属冠固位良好、可操作性强,金属冠粘接力良好,颞下颌关节存在明显的病理性损伤,咬合创伤诱导颞下颌关节炎模型建立成功,可以用于进一步颞下颌关节炎症的相关研究。第二部分 咬合创伤大鼠颞下颌关节的组织形态学观察颞下颌关节HE染色的组织形态学结果表明:1.对照组大鼠髁突组织形态无显著改变。2.EG Ⅰ组大鼠髁突软骨软骨细胞数目减少,各层细胞排列紊乱,并炎症表现。可见4w、8w组增殖层以及肥大层厚度变薄,肥大层细胞明显肿大,聚集呈岛状,有的组织上出现无细胞区。3.EGⅡ组炎症情况较EG Ⅰ组有所减轻,各层细胞排列趋于正常,肥大层以及增殖层与对照组相比较薄。第三部分 大鼠颞下颌关节中PPAR-γ,IL-1β,IL-6 and MMP-13的表达变化大鼠颞下颌关节免疫组织化学染色结果显示:1.CG组中IL-1β、IL-6、MMP13呈弱阳性表达在髁突肥大细胞层,也可少量表达在肥大细胞层与增殖层细胞之间;PPAR-γ呈强阳性表达(p0.05)2.EG I组中4w组IL-6、MMP13和IL-1β在髁突肥大细胞层的阳性表达增强,表达也可少量表达在肥大细胞层与增殖层细胞之间,较]w组表达增多(p0.01);而8w组IL-6、MMP13和IL-1β表达有所降低;PPAR-γ主要表达在肥大细胞层,也可少量表达在纤维层、增殖层、以及软骨下层,EGI各组表达量均小于CG组(p0.05),4w组较1周组PPAR-γ阳性表达降低(p0.05)3.EGⅡ组:1+2w、4+2w及8+2w组中可见IL-1β、MMP13和 IL-6均呈阳性表达(p0.05)。与对应时间EG Ⅰ相比,EGⅡ组阳性表达量呈现下降趋势(p0.05)。另外发现PPAR-γ表达量在去除金属冠后较EG Ⅰ均有所回升(p0.05)。4.EG Ⅰ组、EGⅡ组、CG组在颞下颌关节与听泡交界区以及颞下颌关节窝中并未见明显炎症表达,并且无统计学意义(p0.01)。结论:1.粘接3/4钴铬金属冠可创造咬合高点,诱导TMJ炎症。其方法稳定可靠,适用于咬合与颞下颌关节下一步病因机制的研究2.在咬合创伤1w至4w时,颞下颌关节炎症反应明显,逐渐增加至4w后,咬合创伤后期,其炎症反应减缓。而且去除金属冠后,其炎症反应降低,提示临床上咬合高点导致的创伤中,应尽早去除咬合创伤,临床上有利于TMJ组织愈合。3.咬合创伤环境下,PPAR-γ可能参与了颞下颌关节的调控,PPAR-y的下调可能会导致MMP-13、IL-1β、IL-6表达增加,进而诱导了颞下颌关节的一系列炎症反应。4.本实验未见颞下颌关节与听泡交界区以及颞下颌关节窝中有明显的炎症表达,可能与咬合创伤的模型的时间长短有关,仍然需要进一步实验研究证明。
【图文】:

蜡型,硕士学位论文,山东大学,附录


制作蜡型、

铸造冠,实验组


粘结铸造冠图
【学位授予单位】:山东大学
【学位级别】:硕士
【学位授予年份】:2019
【分类号】:R782.6

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本文编号:2646840


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