EMMPRIN在涎腺腺样囊性癌嗜神经侵袭中的作用及机制研究

发布时间：2020-05-05 01:04

【摘要】：涎腺腺样囊性癌（salivary adenoid cystic carcinoma, SACC）是唾液腺最常见的恶性肿瘤之一，具有嗜神经侵袭（perineural invasion, PNI）的特性。由于SACC极易沿神经浸润性生长和转移，手术切除范围不易掌握，常导致患者预后较差。研究发现细胞外基质金属蛋白酶诱导因子（extracellularmatrix metalloproteinase inducer, EMMPRIN）在多种恶性肿瘤中高表达，通过调节多种基质金属蛋白酶（matrix metalloproteinases, MMPs）的表达从而促进恶性肿瘤的侵袭和转移。然而，EMMPRIN在SACC嗜神经侵袭中的作用及机制尚不明确，仍需进一步研究。研究目的： 1.利用免疫组化、免疫荧光，western blot方法分析EMMPRIN在SACC组织和细胞系中的表达及与SACC嗜神经侵袭的关系。 2.利用蛋白拮抗和RNAi技术分析EMMPRIN在SACC细胞嗜神经侵袭中的作用及可能机制。研究方法： 1.采用免疫组化Envision~(TM)法检测35例嗜神经侵袭和37例无神经侵袭SACC组织中EMMPRIN、MMP-2、MMP-9的表达情况，分析EMMPRIN的表达与嗜神经侵袭、MMP-2及MMP-9表达之间的关系；采用细胞免疫组化、免疫荧光，，western blot方法检测EMMPRRIN在SACC-LM和SACC-83细胞系的表达情况；通过抗体拮抗实验分析拮抗EMMPRIN的表达对SACC-LM细胞体外粘附、明胶酶分泌和侵袭能力的影响。 2.通过RNAi技术和EMMPRIN siRNA慢病毒载体系统构建稳定沉默EMMPRIN表达的SACC-83细胞株。 3.利用黏附实验、明胶酶谱实验分析沉默EMMPRIN对SACC-83细胞黏附和MMPs分泌能力的影响；利用MTT、荷瘤实验、体外嗜神经侵袭模型、体内嗜裸鼠坐骨神经侵袭模型分析沉默EMMPRIN对SACC-83细胞增殖和嗜神经侵袭的影响。主要实验结果： 1. EMMPRIN在SACC组织和细胞系高表达，EMMPRIN、MMP-2和MMP-9在SACC嗜神经侵袭组的表达明显高于无神经侵袭组，EMMPRIN与SACC的嗜神经侵袭现象及MMP-2、MMP-9的表达显著相关，拮抗EMMPRIN在SACC-LM细胞系的表达可显著抑制SACC-LM细胞黏附ECM的能力、MMP-2和MMP-9的表达及体外侵袭能力。 2.成功构建了EMMPRIN siRNA慢病毒真核表达载体系统。结合有限稀释法及G418压力筛选，构建了EMMPRIN siRNA慢病毒载体稳定转染细胞株，证实在筛选获得的稳定转染细胞中，EMMPRIN在mRNA和蛋白水平均可被显著抑制。 3.沉默EMMPRIN基因可显著抑制SACC-83细胞体外增殖、对ECM和神经细胞的黏附、MMP-2和MMP-9的分泌及体外嗜神经侵袭性能力。裸鼠荷瘤实验显示沉默EMMPRIN基因可显著抑制SACC-83细胞的体内成瘤体积及细胞增殖指数。体内嗜裸鼠坐骨神经侵袭模型显示沉默EMMPRIN基因可显著抑制SACC-83细胞的体内嗜神经侵袭，减轻坐骨神经功能障碍和肿胀程度，同时抑制肿瘤和基质细胞MMP-2和MMP-9的表达。结论： 1. EMMPRIN在SACC组织和细胞系高表达，与SACC的嗜神经侵袭现象显著相关。 2. EMMPRIN在SACC嗜神经侵袭过程中发挥重要作用，其促SACC嗜神经侵袭的机制是：（1）诱导SACC细胞对ECM和神经细胞的黏附；（2）诱导SACC及基质细胞MMP-2和MMP-9的表达和活性。 3.通过RNAi技术沉默EMMPRIN的表达可有效抑制SACC细胞体外、体内增殖和嗜神经侵袭，为SACC嗜神经侵袭的基因治疗提供了新的参考靶点。
【学位授予单位】：第四军医大学
【学位级别】：博士
【学位授予年份】：2012
【分类号】：R739.8

【参考文献】