自体骨膜细胞移植修复Beagle犬Ⅲ度根分叉病变的实验研究

发布时间：2020-05-10 13:20

【摘要】： 第一部分:两种培养基对狗骨膜细胞生物学行为的影响目的:研究不同培养基对Beagle犬骨膜细胞生物学行为的影响,为牙周组织工程中种子细胞的培养寻找合适的培养基。方法:取成年Beagle犬颌骨骨膜块,分别用两种培养基(DMEM和RPMI1640)对其组织块进行培养,观察其细胞游出率、传代后细胞增殖能力、碱性磷酸酶活性和矿化结节形成能力。分析两种培养基培养结果,比较其对体外培养的骨膜细胞影响。结果:DMEM培养组组织块细胞游出率、传代细胞增殖能力、碱性磷酸酶活性和矿化结节形成能力均高于RPMI1640组。结论:在DMEM和RPMI1640两种培养基中,DMEM培养基更适合骨膜细胞的增殖和成骨分化。第二部分:β-磷酸三钙陶瓷对狗骨膜细胞生物学行为的影响目的:检测β-磷酸三钙陶瓷(β-TCP)对骨膜细胞生长、增殖和分化特点的影响,探讨β-TCP作为牙周组织工程支架材料的可行性。方法:组织块法培养的骨膜细胞经传代培养后,接种于β-TCP上培养。通过MTT、流式细胞术和碱性磷酸酶试剂盒检测骨膜细胞的增殖和成骨分化情况,并通过扫描电镜观察细胞在材料表面生长情况。结果:骨膜细胞与β-TCP共培养后,仍能维持其增殖能力,在材料表面贴附生长良好,并保持其成骨分化潜能。结论:β-TCP适合骨膜细胞生长和成骨分化,适合作为牙周组织工程的支架材料。第三部分:骨膜细胞移植修复Beagle犬Ⅲ度根分叉病变的实验研究目的:应用自体骨膜细胞移植并结合膨体聚四氟乙烯(e-PTFE)膜引导牙周组织再生术(GTR)修复Beagle犬Ⅲ度根分叉病变,探讨其用于牙周组织再生的可行性。方法:人工构建4只成年Beagle犬慢性Ⅲ度根分叉病变模型,将24颗受试牙随机分成三组,A组:e-PTFE+β-TCP+骨膜细胞;B组:e-PTFE+β-TCP;C组: e-PTFE,即单纯GTR组。每组8颗牙,治疗期间不采用任何口腔卫生措施。术后12周取下颌骨标本,因各组各有2颗牙在造模过程或治疗过程中出现根分叉穿孔或牙龈严重退缩,最终各组有6颗牙作组织学分析,苏木精-伊红(HE)染色和Mallory三色法观察牙周组织再生情况。结果:动物实验发现C组的新生牙骨质和牙周膜的长度分别为3.37±1.21 mm和1.33±0.31 mm,分别占总缺损长度的31.67㳠±12.83㳠和17.70㳠±5.35㳠,牙槽骨生成的面积为2.35±1.26 mm2,占总缺损面积的22.62㳠±7.33㳠;B组的新生牙骨质和牙周膜的长度分别为4.71±1.47 mm和2.34±0.47 mm,分别占总缺损长度的43.02㳠±8.08㳠和22.18㳠±5.19㳠,牙槽骨生成的面积为3.71±2.00 mm2,占总缺损面积的34.77㳠±15.38㳠;A组的新生牙骨质和牙周膜的长度分别为5.53±1.34 mm和3.71±1.82 mm,分别占总缺损长度的50.77㳠±8.19㳠和33.64㳠±13.83㳠,牙槽骨生成的面积为6.21±2.18 mm2,占总缺损面积的60.23㳠±18.16㳠。A组的牙周膜的长度、新生牙槽骨面积及各自在总缺损长度或面积中所占的比例与C组和B组比较,其差异均具有统计学意义(P0.05)。同时,A组的新生牙骨质长度及在总缺损长度中所占的比例与C组比较,其差异也具有统计学意义(P0.05)。结论:应用自体骨膜细胞移植结合引导牙周组织再生术有望促进牙周组织缺损的修复。
【图文】：

原代培养,培养基

细胞形态多为短梭形、长梭形或三角形。在细胞培养 20d 左右，组织块胞密集生长，镜下可见较多同心圆状钙化小结节（见图 1）。此时，细胞原化传代，传代后的细胞生长速度较快，形态无明显变化，一般 4d 即可长满孔表 1 两种培养基中原代骨膜细胞游出率比较组别培养组织块数细胞长出块数（游出率%）细胞长出最短时DMEM 35 31(88.57) 3RPMI1640 28 23(82.14) 3

培养基

图 3 DMEM(A)和 RPMI1640(B)培养基培养骨膜细胞 15d（Von Kossa 染色 ×100）3 讨论牙周支持组织的重建，尤其是牙槽骨的新生，是牙周组织工程研究的重点之一，其首要环节是种子细胞的选择。已经有众多研究表明，骨膜细胞分离培养技术相对简单，体外培养状态下表型稳定，增殖能力强，具有向成骨细胞、软骨细胞和脂肪细胞等多种细胞分化的潜能，因此有望成为牙周组织工程的理想种子细胞之一[12]。寻找体外扩增骨膜细胞的最佳环境和条件是组织工程的重要步骤。在国内外研究中，骨膜细胞多采用 DMEM 培养基，，也有采用 RPMI1640[5]、a-MEM[6]、Ham′s F-12[7]及 Medium199[8]等培养基。但是关于何种培养基更适合于骨膜细胞的培养鲜有报道。本实验通过比较 DMEM 和 RPMI1640 这两种常用的培养基对骨膜细胞生物学行为的影响，以确定适宜骨膜细胞体外生长的培养基。RPMI1640 培养基最初是针对淋巴细胞设计的，具有成分简单、氨基酸含量
【学位授予单位】：福建医科大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2008
【分类号】：R781.4

【引证文献】