Genistein对Tca8113舌癌细胞株增殖、侵袭影响的初步研究

发布时间：2020-05-14 18:00

【摘要】：目的:研究4,5,7-三羟基异黄酮(Genistein)对Tca8113舌癌细胞株增殖及侵袭的影响,并对其作用机制进行初步的探讨。 方法:以Tca8113舌癌细胞株为研究对象,以不同浓度的Genistein为施加因素,并以0.1%DMSO设立对照组。MTT法检测Genistein对Tca8113细胞增殖的影响;以碘化丙啶(PI)和Annex in V-FITC双染色法定量检测细胞凋亡并流式细胞仪测定细胞周期;流式细胞术检测Genistein对Tca8113细胞Bcl-2、Bax、Caspase-3蛋白表达的影响;以细胞划痕实验及transwell侵袭实验检测Genistein对Tca8113细胞侵袭的影响;采用明胶酶谱法及凝胶图像分析系统检测Genistein对胞外分泌MMP-2蛋白的影响;采用Westernblot及细胞免疫组织化学检测Genistein对胞内MMP-2蛋白表达的影响。 结果: 1:Genistein(10μg/mL、15μg/mL)组与对照组相比均能显著的抑制Tca8113细胞的增殖且15μg/mL时细胞增殖抑制率最为明显(P0.01),其抑制率与浓度和时间呈依赖性。 2:流式细胞凋亡及细胞周期检测显示:Genistein(15μg/mL)在24h和48h时与对照组相比都致使Tca8113细胞的凋亡数增加(P0.05),细胞周期分析显示24h时S期细胞数增加,48h时细胞S期细胞比率明显降低,细胞生长周期主要阻滞在G2期,G2/G1比值增大。 3:流式细胞术检测Bcl-2、Bax、caspase-3显示Genistein可使Tca8113细胞中Bcl-2蛋白的表达降低,Bax、caspase-3蛋白表达量增加。表达量与浓度有关。 4:划痕实验及transwell侵袭实验显示Genistein可明显抑制Tca8113细胞的迁移侵袭,Genistein组与对照组之间有明显的差异(P0.01)。 5:Genistein可使细胞外分泌的活性MMP-2及MMP-2表达下调,活性MMP-2下调18.75%,MMP-2下调28.31%;Westernblot及细胞免疫组织化学均检测到Genistein组与对照组相比能降低胞内MMP-2蛋白的表达。 结论: 1:Genistein可明显的抑制Tca8113舌癌细胞株的增殖能力,并促使其发生凋亡。引起细胞周期的改变,减少DNA合成期细胞并将细胞周期阻滞在G2期。 2:推测Genistein对Tca8113细胞的促凋亡作用是通过改变细胞内Bcl-2、Bax及caspase-3蛋白的表达来实现的,其表达的改变可能与Genistein促凋亡的信号通路有关。 3:Genistein可以明显抑制Tca8113舌癌细胞株的体外迁移侵袭能力,并减少Tca8113胞内和胞外分泌的MMP-2蛋白的表达。
【图文】：

A B图 1 A：0.1%DMSO 对照组 48h 时的细胞形态；B：15μg/mlGenistein 组 48h 时细胞形态(倒置显微镜 ×200)Fig1 A：Cell morphous of 0.1%DMSO group at 48 hour；B：Cell morphous of 15μg/mlGenistein group at 48 hour (IM ×200)2.2 不同浓度 Genistein 对 Tca8113 增殖的影响Genistein 对 Tca8113 细胞 48h 时的抑制结果(图 2)，可以看出细胞在 Genistein浓度为 80~10μg/ml 时细胞增殖受到强烈的抑制(P<0.05)；10μg/ml~1.25μg/ml 时变化未见明显的统计学差异(P>0.05)；0.3125μg/ml 时细胞可见轻微的增殖；10μg/ml~1.25μg/ml 时与 0.2%DMSO 及空白组之间未见统计学差异(P>0.05)。48h不同浓度Genistein对Tca8113增殖的抑制0.70.8

- 14 -图4A：Genistein作用Tca8113细胞24h时细胞周期及细胞凋亡；B：对照组24h时Tca8113细胞的细胞周期及凋亡；C：Genistein作用Tca8113细胞48h时细胞周期及细胞凋亡；D：：对照组48h时Tca8113细胞的细胞周期及凋亡。Fig4 A：The cell cycle and apoptosis of Tca8113 effected by Genistein at 24h；B：The cell cycleand apoptosis of Tca8113 in the control group at 24h；C：The cell cycle and apoptosis of Tca8113effected by Genistein at 48h；D：The cell cycle and apoptosis of Tca8113 in the control group at48h
【学位授予单位】：南京医科大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2009
【分类号】：R739.8

【参考文献】

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本文编号：2663729