青蒿琥酯对腺样囊性癌NACC细胞系侵袭及凋亡的影响及其对裸鼠上颌窦移植瘤作用

发布时间：2020-05-15 19:18

【摘要】：目的：探究体外青蒿琥酯(ART)作用于人腺样囊性癌NACC细胞系后对该细胞侵袭、凋亡的影响；探究体内ART对裸小鼠NACC上颌窦移植瘤生长抑制作用。探讨ART抑制NACC细胞具体的相关作用机制,抑制效果及作为抗肿瘤药物的临床的应用前景。方法： (1)NACC细胞系经ART干预后,分为空白对照组,25μg/ml、50μg/ml、100μg/ml ART共4组。吖啶橙/溴化乙锭(AO/EB)对NACC细胞染色,观察ART是否会引起NACC细胞的凋亡,并观察经以上不同浓度ART干预后NACC细胞凋亡的形态学改变,计算各组NACC细胞凋亡率。 (2) Transwell小室法测定空白组,25μg/ml、50μg/ml、100μg/ml ART组NACC细胞的跨膜穿过细胞数,以结果数据代表各组细胞的侵袭能力。 (3) NACC细胞经ART干预后,提取各组NACC细胞RNA,荧光定量聚合酶链反应(Real-time qPCR)法测定NACC细胞中VEGF目的基因的mRNA相对表达量。 (4)免疫细胞化学法对经ART干预后的NACC细胞胞浆中血管内皮生长因子(VEGF)表达的蛋白进行染色,经Image-Pro Plus6.0软件分析得出各组的VEGF相对蛋白表达量。 (5)建立NACC裸鼠上颌窦原位移植瘤模型,成瘤后随机分成生理盐水组,ART200mg/kg组、ART400mg/kg组、DDP2.0mg/kg组共4组。药物组每只隔日腹腔给药注射ART和DDP一次,共计10次；对照组给药等量生理盐水。测量各组裸鼠移植瘤体积；Micro-CT法观察移植瘤与周围组织关系。HE染色观察肿瘤组织病理改变及对周围组织的侵犯。结果： (1)经AO/EB染色,与空白对照组对比观察,各ART组均能观察到凋亡细胞,25μg/ml、50μg/ml、100μg/ml ART组的NACC细胞凋亡率分别为7.73%,16.24%,30.45%。各ART组与对照组比较差异具有显著性(P0.05), ART组间两两比较差异具有显著性(P0.01)。 (2)ART各组跨膜细胞数随着ART浓度增高而逐渐减少,空白组124.31±12.84,25μg/ml ART组97.46±11.13,50μg/ml ART组83.72±10.59,100μg/ml ART组61.18±8.93。各ART组与空白组比较差异有统计学意义(P0.01),ART组间比较除ART25μg/ml组与ART50μg/ml组差异不显著(P0.05)其余差异有统计学意义(P0.05)。 (3)各ART组VEGF目的基因的mRNA相对表达量随着ART浓度增高而逐渐减低,表达量由高到低分别为0.3186±0294,0.2994±0.0471,0.2812±0.0258,0.2415±0.0341,明显低于空白对照组(1.0000),差异具有显著性(P0.01)。 (4)随着ART浓度增高,各ART组胞浆中VEGF的蛋白阳性表达逐渐降低,平均吸光密度值(MOD)空白组为0.2367±0.0631,ART组分别为0.2012±0.0809,0.1679±0.0781,0.0862±0.0034,0.0612±0.0093。各ART组与空白组比较差异有统计学意义(P0.05),100μg/ml ART组与200μg/ml ART组差异不显著(P0.05),其余ART组间比较差异显著(P0.05)。 (5)生理盐水组肿瘤体积64.72±6.32mm3, ART200mg/kg组66.19±5.58mm3, ART400mg/kg组49.01±5.86mm3,DDP组44.53±6.51mm3, ART400mg/kg组和DDP组与对照组比较差异有统计学意义(P0.05)。结论： (1)青蒿琥酯可以有效地抑制腺样囊性癌NACC细胞系的体外增殖、克隆、侵袭能力,促进NACC细胞的凋亡,其机制有可能是通过下调NACC细胞中VEGF的表达。 (2)一定浓度的青蒿琥酯可以抑制裸小鼠上颌窦原位移植瘤的生长。
【学位授予单位】：广西医科大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2013
【分类号】：R739.87

【参考文献】