睡眠剥夺对大鼠颞下颌关节结构及p38MAPK蛋白表达影响的实验研究

发布时间：2020-05-17 10:21

【摘要】：目的：探讨睡眠剥夺(SD)对大鼠颞颌关节区P38MAPK信号转导通路的影响,以及该通路是否介导了SD对大鼠颞颌关节的损伤。方法：1、45只wistar雄性大鼠随机分成大平台对照2d组、对照4d组、对照6d组、对照8d组,SD2d组、SD4d组、SD6d组、SD8d组以及空白对照组,每组5只；各组大鼠在同一笼中饲养,实验前,将各组大鼠放入各自的模型中,不施加任何刺激,使其熟悉环境一周。SD组大鼠采用改良多平台法建立睡眠剥夺模型。睡眠剥夺箱的长、宽、高分别为110cm×70cm×40cm,其内放置15个高为8cm、直径为6.3cm的平台,其周围注满水,平台高于水面约1cm。大鼠在平台上能自由饮水、摄食,但要睡眠时因头触水中而惊醒,以致被睡眠剥夺。大平台对照组除平台直径增大,其余因素与SD组一致,大鼠在大平台上可以进行部分自由活动,并可以进入睡眠。空白对照组正常饲养。 2、大鼠在建模成功后分别对实验2d组、4d组、6d组、8d组、空白对照组大鼠HE染色观察同一部位的颞颌关节切片形态变化,免疫组化SP法检测大鼠颞颌关节区(髁突)磷酸化P38MAPK蛋白的表达,并与对照组进行比较。 3、旷场实验：将大鼠放已制备好的旷场试验箱中。计算大鼠5min内水平活动得分和垂直活动得分。 4、统计学分析：采用SPASS16.0统计软件进行统计学分析,以P0.05为差异有统计学意义。结果：1、一般状态观察：实验中,随SD时间延长,SD组大鼠有恐慌、行为反应敏感、激烈等表现；对照组则表现正常。 2、HE染色观察：对照组大鼠髁状突软骨由浅入深依次分为纤维性关节表面带、多细胞带、纤维软骨带和钙化软骨带。对照组髁突、关节盘均未见明显变化。SD2d组、4d组可见大鼠颞下颌关节髁突表面部分胶原纤维水肿、松解,部分关节盘出现炎性反应。SD6d组组织变化较明显,关节盘出现玻璃样变性、溶解断裂,甚至形成裂隙,髁突纤维软骨内有的骨细胞消失,骨陷窝空虚。SD8d组与SD6d组大鼠颞颌关节结构变化类似,部分标本结构较6d组减轻。 3、免疫组化SP法显示：磷酸化MKK6主要在细胞质表达,阳性染色呈棕黄色或黄色。对照组少见磷酸化MKK6阳性细胞,SD组中磷酸化MKK6阳性细胞较对照组增多(P0.05),染色深棕,且随SD时间延长逐渐增多,于SD6d达到峰值。磷酸化P38MAPK主要在细胞核表达,少量在细胞质表达,阳性染色呈棕黄色或黄色。对照组少见磷酸化P38MAPK阳性细胞,SD组中磷酸化P38MAPK阳性细胞较对照组增多(P0.05),染色深棕,且随SD时间延长逐渐增多,于SD6d达到峰值。 4、旷场试验结果显示：空白对照组与大平台对照组比较,大鼠水平活动评分、垂直活动均无差异(P0.05)。SD2d、4d、6d、8d组与相应大平台对照组比较,SD组大鼠水平活动评分、垂直活动评分均明显高于对照组(P0.05) 结论：旷场试验结果显示该睡眠剥夺模型是理想的心理应激模型,能够有效模拟人类受到外界因素影响后的情绪心理变化。HE结果显示,与对照组比较,SD组大鼠颞颌关节的结构在睡眠剥夺4d时开始出现明显的改变,表现为髁突表面部分区域凹凸不平,表面胶原纤维水肿、松解。关节盘出现炎性反应,于睡眠剥夺6d时损伤最严重,8d时出现一定的适应性改变。免疫组化结果显示,与对照组比较,磷酸化MKK6、磷酸化P38MAPK阳性细胞数随SD时间延长而增多,于SD6d达到高峰。本研究结果表明睡眠剥夺应激性的激活了大鼠颞颌关节区P38MAPK通路,该通路可能介导了对大鼠颞颌关节区的损伤过程。
【学位授予单位】：山东大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2013
【分类号】：R782.6

【参考文献】