雌激素通过miRNA101-3P影响特发性髁突吸收患者滑膜成纤维细胞HAS2表达的研究

发布时间：2020-05-23 02:15

【摘要】：背景:特发性髁突吸收(Idiopathic condylar resorption,ICR)是一种病因不明的颞下颌关节疾病,不同于TMJOA中纤维软骨的缓慢破坏,ICR进展迅速,严重时可导致大部分髁突吸收。ICR具有典型的临床和放射学表现,包括好发于12-24岁之间的女性、渐近性前牙开鄈、面部畸形、髁突快速吸收破坏等。但目前国内外对于ICR发病机制的研究较为罕见,且并未见报道有效的研究成果。虽然病因不清,但现有研究认为ICR的易感因素包括激素变化、不良口腔习惯、创伤、颞下颌关节内紊乱和正畸治疗等。结合既往研究和其临床表现,我们推测,E2的变化可能在ICR发病机制中起到重要作用。本研究将探讨E2在ICR发病过程中的作用机制。为ICR的发病机制的探索提供一定的理论基础,并最终对ICR的临床诊治提供帮助。研究方法:1.从诊断为颞下颌关节疾病的患者关节上腔中提取关节滑液,通过ELISA检测滑液中E2和透明质酸(hyaluronan,HA)的表达。2.通过外科手术的方式获取颞下颌关节滑膜组织标本,采用免疫组化和western blot对滑膜细胞中ER的表达情况进行观察。3.使用E2对滑膜成纤维细胞(synovial fibroblasts)进行刺激,采用RT-PCR分析滑膜成纤维细胞中mi RNA101-3p的表达,并确定E2最佳刺激浓度及时间。4.对ICR患者的滑膜成纤维细胞进行mi RNA101-3p模拟物及抑制物瞬时转染,采用PCR、IF和WB检测滑膜成纤维细胞中透明质酸合酶2(HA synthase2,HAS2)的表达,并通过双荧光素酶报告基因测定HAS2与mi RNA101-3p的结合位点。研究结果:1.ELISA检测结果显示ICR患者的颞下颌关节滑液中E2浓度显著增高,而HA浓度显著降低,并且它们之间呈负相关性(Pearson r=-0.3179,p=0.0230)。2.免疫组化结果显示ER在ICR患者的滑膜内层和滑膜下层均有表达,WB检测显示在ICR患者的滑膜成纤维细胞中,ER表达显著升高,大约比DD滑膜成纤维细胞高2.1倍(P0.05);3.PCR检测结果显示在ICR患者的滑膜成纤维细胞中mi RNA101-3p表达最为显著;E2在浓度为10 n M及作用时间为12h的情况下,影响最大,并且E2可通过ER途径调控mi RNA101-3p表达;4.PCR和WB检测结果显示在ICR患者的滑膜成纤维细胞中E2通过mi RNA101-3p负向调控HAS2表达;5.双荧光素酶测定证明mi RNA101-3p通过3'-UTR区域中的位点结合直接靶向调节HAS2的表达。6.统计学方法使用了线性回归分析,Mann Whitney U检验,T检验和单因素方差分析对各组数据进行处理。结论:我们推测E2通过mi RNA101-3p靶向调节ICR患者的滑膜成纤维细胞中的HAS2表达,并成负相关性。E2/mi RNA101-3p/HAS2通路可能在ICR的发病机制中起重要作用。
【图文】：

重庆医科大学博士研究生学位论文PSS 19.0 软件进行统计分析，，所有的数据均以均值（M）±。采用 T 检验进行组间分析，当 P＜0.05 的时候具有统计的关系使用 linear regression 分析。果液中 E2 浓度表达存在差异图 1-1 所示：ELISA 检测结果显示 ICR 患者滑液中的 E2 浓显升高（P＜0.05），说明 ICR 患者滑液中的 E2 浓度显著升

图 1-2 DD、ICR 和 OA 各组中的 HA 浓度表达（P＜0.05）Fig. 1-2 the concentration of HAin DD, ICR, and OA（P＜0.05） E2 与 HA 的相关性观察图 1-3 所示：通过线性回归分析，E2 浓度与 HA 表达成负
【学位授予单位】：重庆医科大学
【学位级别】：博士
【学位授予年份】：2019
【分类号】：R782.6

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本文编号：2676978