p38MAPK在周期性牵张力对人颌面部增生性瘢痕成纤维细胞分化影响中的作用

发布时间：2020-05-23 17:38

【摘要】：目的：增生性瘢痕组织的形成是创口愈合过程中不可避免的,并且产生了很多不良的影响。尤其在口腔颌面外科许多唇腭裂的患儿做完修复手术后常常需要做二期手术来进一步改善面容,在伤口愈合过程中形成的瘢痕会影响他们的美观和功能,进而影响患者的心理。伤口愈合过程中受到多种因素的影响,牵张力、成纤维细胞和平滑肌肌动蛋白(a-SMA)是伤口愈合不可缺少的三个要素。但是牵张力的存在促进了伤口过度愈合形成增生性瘢痕。在此过程中,牵张力如何被细胞感受并传递至细胞内环境,从而导致细胞发生一系列生物学效应的确切机制尚不十分清楚。细胞力学是组织工程和细胞工程的基础之一,随着细胞力学的发展,常常要研究机械力对缃胞形态变化、生长和分化的影响。本研究拟在成功构建瘢痕成纤维细胞体外原代培养-力学刺激模型的基础上,探讨p38MAPK在张应力介导的瘢痕成纤维细胞分化中的作用及调控机制,从而阐明机械应力作用下瘢痕成纤维细胞改建的分子调控机制,这将帮助口腔颌面外科临床医生采用不同的方法诱导或者调控瘢痕形成,具有重要的指导意义。 方法：增生性瘢痕成纤维细胞原代培养体系的建立与细胞培养：取唇腭裂患者二期修复术切下的瘢痕组织,应用机械分离-酶消化联合法对瘢痕成纤维细胞进行原代体外培养,倒置显微镜下观察细胞形态学表现及波形蛋白染色进行瘢痕成纤维细胞表型鉴定。以体外原代培养的瘢痕成纤维细胞为研究对象,通过成功构建瘢痕成纤维细胞体外培养-力学刺激模型,使用多通道细胞牵张应力加载系统,对待测细胞持续加载0h、6h、12h的周期性张应力,其中力值为10%的细胞形变,频率为10cycles/min,加力()h组为对照组,使用相差显微镜从形态学上观察不同持续时间的张应力对成纤维细胞的影响,通过p38MAPK表达的量来检查不同组之间p38MAPK的表达,通过RT-PCR检测周期性张应力下不同组之间a-SMA mRNA和TGF-β1mRNA表达的变化,通过Western blot检测周期性张应力下不同组之间a-SMA、 TGF-β1和P38MAPK蛋白的表达变化,然后应用p38MAPK特异性的抑制剂SB203580来明确p38MAPK在应力介导的成纤维细胞分化中的作用。应用SPSS17.0统计软件对实验数据进行统计学分析。 结果： 1.采用机械分离-酶消化联合法瘢痕成纤维细胞体外培养体系,经过倒置显微镜观察及波形蛋白染色鉴定,确认分离培养的细胞符合成纤维细胞的生物学特征; 2.p38MAPK表达量的结果显示，，,随着加力时间的延长,p38MAPK的表达逐渐升高,RT-PCR结果显示,随着加力时间的延长,a-SMA mRNA和TGF-β1mRNA的表达量也逐渐升高,差异具有统计学意义(P0.05)； 3.Western blot结果显示,随着加力时间的延长,a-SMA、TGF-β1和p38MAPK的蛋白表达逐渐升高,差异具有统计学意义(P0.05)； 4.各组加入p38MAPK特异性阻断剂后再对细胞施加周期性张应力。成纤维细胞分化以及a-SMA的蛋白表达减少,随着加力时间的延长,a-SMA、TGF-β1和p38MAPK的表达量也升高但是较不加抑制剂SB203580相比表达减少,差异具有统计学意义(P0.05)； 结论： 1.应力介导的瘢痕成纤维细胞分化参与了增生性瘢痕形成过程中成纤维细胞分化的改建。 2. p38MAPK在这一过程中发挥重要的作用。
【学位授予单位】：青岛大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2013
【分类号】：R782.2

【参考文献】

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本文编号：2677717