CTLA-4-Ig影响破骨细胞分化成熟的初步研究

发布时间：2020-05-23 19:58

【摘要】：目的:观察CTLA-4-Ig对佛波酯和1,25(OH)_2VD3诱导U937细胞分化为破骨细胞样细胞成模的影响,为口腔正畸过程中控制骨改建加速牙移动的药物研究提供潜在的靶点。方法:实验分三组:空白组,诱导组,实验组,采用6孔板培养细胞各组重复三次。诱导组用佛波酯诱导2天后再用佛波酯和1,25(OH)_2VD3诱导6天,中间更换1次诱导液;实验组在诱导组的基础上于第3天加入CTLA-4-Ig进行干预。利用倒置显微镜动态观察细胞形态学变化,利用普通光学显微镜、抗酒石酸酸性磷酸酶(TRAP)染色对成模的破骨样细胞鉴定及计数,实时荧光定量PCR(Real-time PCR)检测破骨细胞标志性酶MMP-9,TRAP,CTSK,RANK的mRNA水平,同时酶联免疫吸附试验(ELISA)检测了不同组细胞培养液的TRAP/CTSK,结果采用均值±标准差表示,采用t检验进行统计学分析。结果:1.U937细胞呈小而略不规则圆,一直呈悬浮状态生长;佛波酯和1,25(OH)_2VD3诱导2天后贴壁生长、体积逐渐变大并呈梭形、多角形等不同形态。TRAP染色显示:空白组呈阴性,8天后诱导组出现阳性,实验组也可见阳性着色细胞,但数量显著减少(P0.05)。2.Real-time PCR结果显示:诱导组的MMP-9,TRAP,CTSK,RANK的mRNA水平较空白组2~(-ΔCT)值分别增加1.26、21.78、1.74、1.60倍(P值均0.05);诱导组MMP-9,TRAP,CTSK,RANK的mRNA水平较实验组2~(-ΔCT)值依次增高0.25、2.50、0.64、0.10倍(除RANK外P值均0.05)。3.CTSK和TRAP蛋白质水平与其m RNA表达量的组间对比结果一致:诱导组细胞培养液的CTSK和TRAP的浓度平均较空白组高2.72倍和2.37倍(P值均0.05);诱导组细胞培养液的CTSK和TRAP的浓度平均较实验组高0.74倍和0.29倍(P值均0.05)。结论:本研究证实CTLA-4-Ig在无T细胞存在情况下能直接抑制U937细胞的破骨细胞成模,为我们确定破骨细胞前体细胞上的CTLA-4-Ig受体分子,并为进一步进行药物加速牙移动促进牙槽骨改建的研究奠定了基础。
【图文】：

诱导组U937细胞接种诱导过程形态学变化观测（200×）

1 诱导组 U937 细胞接种诱导过程形态学变化观测（200×he U937 cells morphological changes in the induction group长良好的 U937 细胞初始形态，细胞小而略不规则圆，一长细胞生长情况记录，，体积逐渐变大并呈梭形、多角形等不以不同形态为主；D 为诱导第 8 天结束细胞形态记录，仍可较多的大而圆的巨细胞。 对诱导组进行染色鉴定，如图 2 所示。
【学位授予单位】：川北医学院
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2018
【分类号】：R783.5

【参考文献】

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本文编号：2677875