消散因子石英晶体微天平和荧光猝灭动态监测表没食子儿茶素没食子酸酯与人唾液的相互作用

发布时间：2020-05-24 00:12

【摘要】： 目的:采用QCM-D在体外原位、实时和动态监测人全唾液(WS)、腮腺唾液(PS)和下颌下腺/舌下腺唾液(SMSLS)在HA芯片表面吸附和解离的过程。通过自组装单层膜(SAM)的WS和PS,测量EGCG对WS和PS生物膜的吸附和解离的过程。采用荧光猝灭实验,以考察EGCG猝灭WS和PS的效果,方法:收集刺激性的上述三种唾液,监测唾液蛋白吸附于HA芯片表面以及SAM的WS和PS吸附EGCG所造成的频率改变(ΔF)和消散因子变化(ΔD),及形成生物膜的质量(m)、厚度(h)、剪切弹性模量(μ)和剪切粘度(η)。根据Langmuir(L)和Freundlich(F)吸附等温线的相关系数判断EGCG在WS和PS膜表面的吸附模型,计算吸附动力学常数:L常数(K)、饱和吸附量(Mm)、F常数(Kf)、F吸附强度常数(1/n)。采用EGCG作为WS和PS的荧光猝灭剂,考察EGCG猝灭WS和PS的效果和猝灭类型,计算表观静态猝灭常数(K)、静态猝灭常数(Ks)、表观静态猝灭结合常数(KA)、静态猝灭结合常数(KLB)和结合位点数(n)。结果:SMSLS的蛋白质吸附量最大,形成的膜最厚,PS最小,WS介于两者中间。SMSLS膜的硬度最小,膜的流动性最大,剪切弹性模量和剪切粘度最小。WS膜的硬度介于PS和SMSLS之间。PS膜表面形成EGCG吸附层后,剪切弹性模量和剪切粘度变小。WS膜含水量大,吸附EGCG后部分水分被挤出,因此剪切弹性模量和剪切粘度增大。采用L和F吸附等温式均可合理表征EGCG对WS和PS膜的吸附行为。相比PS膜,WS膜对EGCG的吸附容量更大,亲和力更好。EGCG对WS和PS中的荧光基团敏感性相近。本实验的猝灭类型是静态猝灭,反应没有引起蛋白质的构象发生改变。一个唾液蛋白质分子上存一个EGCG结合位点。结论:唾液成分不同,在HA上形成生物膜的特性不同;不同唾液生物膜对EGCG吸附的容量和亲和力不同;唾液蛋白质分子与EGCG结合形成复合物使唾液蛋白质荧光猝灭。
【图文】：

儿茶素,衍生物

[7]。图1. 儿茶素衍生物3. 吸附作用唾液蛋白质对牙表面的吸附，茶色素对唾液蛋白质生物膜的选择性和竞争性吸附，是形成茶色素唾液生物膜，进而造成外源性牙着色。目前，研究吸附的方法大致可以分为两大类：传统的生物化学法和现代仪器分析法。生物化学法包括比色法、免疫学方法、荧光标记法和放射性同位素标记法等[8]。比色法易受到其他物质的干扰；免疫学方法检测时间较长；荧光标记的方法极有可能会改变吸附蛋白的构象和功能，从而影响了蛋白的吸附行为；放射性同位素标记法则容易发生放射性污染。现代仪器分析法包括表面等离子共振（surface plasmon resonance, SPR）、消散因子石英晶体微天平（quartz crystal microbalance with dissipation, QCM-D）、椭偏仪(Ellipsometry)和原子力显微镜（atomic force microscope, AFM）等等。SPR可以实现对蛋白吸附的实时动态监测，，具有较高的灵敏性，但是它对基底表面要求较高，且需要建立模型。椭偏仪可以测定吸附蛋白的层厚和反射指数，无需标记，可以实现实时动态监测，但是它需要有一个平整光滑的表面，否则很难实现其精确测量；AFM可以在液相环境下观察吸附蛋白的表面形态

分子结构图,分子结构

图2. EGCG的分子结构工作原理声学技术，以石英晶体芯片为传感器，不仅可度和密度，而且还可以提供多个倍频的能量消效应对其电极表面质量变化进行测量的仪器。石、粘度、电导率、介电常数等）变化非常敏感，微观过程中的微小变化，获取丰富的信息，为研提供了一种强有力的手段。ey[9]导出了石英晶体电极表面沉积的金属膜质量uerbrey公式： mNSfΔf = Δρ2其中f 石英谐振英的密度， S石英谐振器电极的面积cm2， Δ
【学位授予单位】：福建医科大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2009
【分类号】：R78

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