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牙周韧带细胞与骨髓基质细胞促进牙周组织再生能力的比较研究

发布时间:2020-06-08 00:58
【摘要】: 目的比较骨髓基质细胞(bone marrow stromal cells, BMSCs)和牙周韧带细胞(periodontal ligament cells, PDLCs)促进牙周组织再生的能力,为牙周组织的再生治疗提供依据。 方法1.体外观察α-MEM、DMEM-LG和RPMI 1640三种培养基对Beagle犬BMSCs增殖与分化的影响。2.体外观察脱细胞真皮基质(acellular dermal matrix, ADM)与BMSCs生物相容性;并将ADM作为成骨诱导后BMSCs的载体,植入裸鼠皮下,单纯的ADM作为对照组,分别于术后4W和8W观察大体标本及组织学情况。3.体外通过实时荧光定量聚合酶链反应(Real-time fluorescence quantitative polymerase chain reaction, Realtime PCR)、免疫细胞化学染色、Von Kossa染色等方法比较BMSCs和PDLCs再生组织的能力。4.将雄性裸鼠12只随机分两组,每组6只,于每只皮下植入ADM、BMSCs+ADM、PDLCs+ADM。4W和8W后分别处死一组取标本,常规固定、脱钙、包埋、切片后进行苏木精-伊红(hematoxylin-eosin, HE)染色、Gomori特殊染色和免疫组化染色,以比较BMSCs和PDLCs再生组织的潜能。 结果1.α-MEM组24h内贴壁的细胞数目最多;消除贴壁差异后,α-MEM和DMEM促增殖作用相近;α-MEM组碱性磷酸酶(alkaline phosphatase, ALP)表达量最高,但矿化结节形成数目较少,DMEM组矿化结节形成个数最多。2.体外培养观察BMSCs与ADM有良好的生物相容性;实验组4W,ADM部分降解吸收,BMSCs在其中生长良好,出现新生组织,部分出现类骨样结构;8W,ADM大部分吸收,形成大量的新生组织和类骨样结构;单纯ADM组新生组织形成较少,支架材料降解速度与实验组类似。3. Realtime PCR检测结果发现PDLCs中胶原Ⅻ和骨保护素(osteoprotegerin, OPG)表达量都高于BMSCs(P0.05),ALP表达含量在二者之间差异无显著性(P0.05);细胞免疫组化染色显示PDLCs中胶原Ⅻ表达的量高于BMSCs(P0.05),而OPG染色、ALP活性检测及Von Kossa染色结果都表明BMSCs成骨能力高于PDLCs。4. 4W和8W组织学观察和免疫组化染色显示BMSCs形成类骨样结构多于PDLCs,而牙周韧带形成能力仍小于PDLCs。 结论1.培养基α-MEM促进BMSCs的增殖,但促矿化能力较弱;DMEM-LG培养基促进细胞增殖和分化,较适合BMSCs的培养。2. ADM可为细胞的生长和分化提供理想的三维空间,并具有作为牙周组织工程支架材料的潜力,在组织工程化牙周膜的构建中有良好的应用前景。3.体内外研究表明BMSCs成骨能力高于PDLCs,但其形成牙周韧带的能力低于PDLCs。
【图文】:

流程图,流程图,集落形成,细胞密度


图 1-1 BMSCs 获取流程图2. 贴壁状况取 P6代细胞,调整细胞密度为 2.5×104/mL,每孔 200μL,接种到 96 孔别在 2h7h10h24h,MTT 法测定 A492。3. 细胞增殖3.1 MTT 法检测取 P4代细胞,调整细胞密度为 1.0×104/mL,每孔 200μL,接种到 96 孔用其中一种培养基接种 24h 后,消除贴壁差异,,再分别更换不同培养基进MTT 法测定接种后 1-7d 的 A492,结果取平均值。其余两组检测方法同上。3.2 集落形成取 P4代细胞,以 1.0×105/mL 接种至 100mm 培养皿,分别用 DMEMRα-MEM 培养基进行培养,1w 后结晶紫染色观察集落形成情况。3.3 细胞周期

状况,细胞,统计学方法,膜状物


4.2 Von Kossa 染色选取 P3代细胞,以 5.0×104/孔接种 24 孔板,每组 6 孔,每隔 3d 换液,连续培养至出现肉眼可见的白色结节,作 Von Kossa 染色,在倒置显微镜下观察矿化结节染色情况。5. 统计学方法应用 SPSS 13.0 进行统计学处理,对 ALP 活性贴壁状况检测结果采用单因素方差分析,以 P<0.05 为显著性标准。结果1.细胞培养观察接种后,皿底沉淀有大量血细胞,无法观察到细胞贴壁情况。5d 全量换液,可见大部分细胞呈梭形,少数呈现圆形或多角形,α-MEM 组细胞与其它两组相比数量较多(图 1-2)。DMEM 和 RPMI 1640 组培养 10-12d 可达 90%融合,即可进行消化传代。α-MEM 组约 7d,若此时未及时传代,易覆层生长,形成膜状物漂浮于培养基中。
【学位授予单位】:福建医科大学
【学位级别】:硕士
【学位授予年份】:2010
【分类号】:R781.4

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本文编号:2702270

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