人牙周膜成纤维细胞体外三维立体培养的初步研究

发布时间：2020-06-08 08:13

【摘要】： [目的]对人牙周膜成纤维细胞进行体外藻酸盐支架三维立体培养,并用碱性成纤维细胞生长因子及脂多糖进行干预观察细胞的增殖情况,为进一步了解诱导牙周组织修复的机制提供科学的依据。 [方法]组织块培养法获取人牙周膜成纤维细胞,按1:2或1:3的比例进行传代,取4—7代的细胞进行实验。将第4代的细胞进行藻酸盐三维支架培养,比较细胞在二维及三维空间下的增殖情况。在藻酸盐支架三维细胞培养第9天时,分别以1ng/ml、10ng/ml、500ng/ml、1000ng/ml浓度组碱性成纤维细胞生长因子,作用于三维生长状态下的人牙周膜成纤维细胞,用MTT法测定OD值,观察碱性成纤维细胞生长因子对人牙周膜成纤维细胞的增殖的影响,并对实验数据进行统计学分析。在细胞培养第7天时,分别以10 ng/ml、100 ng/ml、500 ng/ml、1000ng/ml浓度组脂多糖,作用于三维生长状态下的人牙周膜成纤维细胞,用MTT法观察脂多糖对人牙周膜成纤维细胞的增殖的影响,并对实验数据进行统计学分析。 [结果]在本实验条件下第4代细胞在三维培养下与二维培养下比较细胞增殖情况未见明显差异。与对照组比较,1ng/ml、10ng/ml、500ng/ml、1000ng/ml浓度的碱性成纤维细胞生长因子作用于三维培养状态下的人牙周膜成纤维细胞,在10ng/ml浓度时(P＜0.05)促增殖作用最明显。与对照组比较,10ng/ml、100 ng/ml、500 ng/ml、1000ng/ml浓度的脂多糖作用于三维培养状态下的人牙周膜成纤维细胞,在100ng/ml浓度时(P＜0.05)抑制作用最明显。 [结论]在本实验条件下,在三维二维空间培养中的HPDLFs增殖未见明显差异。10ng/ml浓度的碱性成纤维细胞生长因子能促进HPDLFs的增殖,100ng/ml浓度的脂多糖能抑制HPDLFs的增殖。
【图文】：

图4细胞传至第3代观察(100x)(二)、细胞来源鉴定结果由于牙周组织的遗传特性和组织特性，尤其是原代培养所得到的细群构成〔16]，加之个体差异、培养技术和培养条件的影响，相同组织来源的尽相同的生物学特性，因此必须对所培养的细胞进行生物学特性观察并作同时寻找合适的培养条件，以保持细胞生物学性状的稳定。本实验免疫组化代HPDLFs，波形丝蛋白染色阳性，(见图5)角蛋白染色阴性，(见图6)证为来自中胚层的非上皮原性、非神经原性、非血管内皮原性的成纤维细胞，培养的细胞来源可靠，可用于下一步的研究。

尽相同的生物学特性，因此必须对所培养的细胞进行生物学特性观察并作细胞来源鉴定，同时寻找合适的培养条件，以保持细胞生物学性状的稳定。本实验免疫组化结果显示，第四代HPDLFs，波形丝蛋白染色阳性，，(见图5)角蛋白染色阴性，(见图6)证明所培养的细胞为来自中胚层的非上皮原性、非神经原性、非血管内皮原性的成纤维细胞，说明本实验所培养的细胞来源可靠，可用于下一步的研究。
【学位授予单位】：昆明医学院
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2009
【分类号】：R78

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本文编号：2702792