腺病毒介导TRAIL基因对涎腺腺样囊性癌细胞靶向作用及机制研究

发布时间：2020-06-10 20:00

【摘要】： 涎腺腺样囊性癌是口腔颌面部较常见的恶性肿瘤,具有嗜神经和血管等特性,对放疗和化疗不敏感,传统治疗方法不能取得令人满意的治疗效果,随着分子生物学技术发展,转基因治疗涎腺腺样囊性癌成为新的策略,但转基因治疗肿瘤存在特异性差的问题。近年来研究发现hTERT在永生化细胞系和85%的人肿瘤组织中都具有较高的活性,而在大多数正常体细胞中则无活性,本课题组前期研究发现hTERT在涎腺腺样囊性癌阳性率100%,而在正常涎腺组织内阴性或弱阳性。肿瘤坏死因子(TNF)相关的凋亡诱导配体(TRAIL)是TNF家族成员,能引起多种肿瘤细胞凋亡,而对正常细胞影响较小,目前,TRAIL已被应用于多种肿瘤的转基因治疗研究。 针对肿瘤转基因治疗特异性差的问题,根据hTERT和TRAIL均具有肿瘤特异性的特性,在国家自然基金面上项目和国家自然基金国际合作项目资金支持下,以同源重组法构建了AdCMV-TRAIL和AdTERT-TRAIL腺病毒载体,通过体外、体内转染涎腺腺样囊性癌细胞或正常细胞,探讨它们对涎腺腺样囊性癌的作用,结果显示通过双特异性AdTERT-TRAIL实现了TRAIL基因在SACC-83细胞中表达,进而对涎腺腺样囊性癌细胞具有肿瘤特异性杀伤作用:其对菏瘤裸鼠器官、肝脏功能和全血成分没有明显影响,这种特异性杀伤作用是由TRAIL基因激活了Caspase-3基因,从而启动了下游的凋亡途径。这就为AdTERT-TRAIL转基因治疗涎腺腺样囊性癌奠定了理论基础和实验技术基础。
【图文】：

转染效率一EGFP转染ACC一2和SACC一8324h后，在EGFP表达后发出绿色荧光的细胞，在转染(图3.1，3.2)，此后逐渐减弱，至lw时仍未转染腺病毒组细胞未见荧光着色;每个普通光和荧光下照相，然后分析转染效率时两种腺样囊性癌细胞转染效率达到了97用此MOI值作为转染时腺病毒的滴度。

AdCMV一EGFP转染腺样囊性癌SACC一83细荧光显微镜下影像(x400)性TRAIL基因mRNA检测3d，提取肿瘤细胞总RNA进行RT一PCR扩285、185、553条清晰的带，说明所提取。经RT一PCR扩增琼脂糖电泳紫外灯下观AIL转染肿瘤细胞后，，可扩增出约594bP瘤细胞中则未扩增出目的片段;2种腺样APDH片段(图3.3，3.4)。
【学位授予单位】：吉林大学
【学位级别】：博士
【学位授予年份】：2009
【分类号】：R739.87

【参考文献】

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本文编号：2706787